CEVHAN   27013
CENTRO DE VIROLOGIA HUMANA Y ANIMAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Producción de fragmentos de cadena sencilla dirigidos contra el virus de la Fiebre Aftosa?.
Autor/es:
GONZÁLEZ, MAURO ; SEKI, CRISTINA; D'ANTUONO, ALEJANDRA ; NUÑEZ, DENISE ANABEL; MATTION, NORA; ZIRALDO, MICAELA; LÓPEZ, NORA
Lugar:
CABA
Reunión:
Jornada; XIX Jornadas de Jovenes Investigadores; 2019
Institución organizadora:
Facultad de Ciencias Veterinarias - UBA
Resumen:
Los fragmentos derivados de anticuerpos recombinantes (rAb), y particularmente losfragmentos variables de cadena sencilla (single-chain variable fragment - scFv), hansurgido recientemente como una alternativa al empleo de anticuerpos monoclonales (mAbs)para el diagnóstico médico y aplicaciones terapéuticas. Los scFv contienen el sitiocompleto de unión al antígeno, que incluye los dominios variables de la cadena pesada(VH) y liviana (VL) de un Ab, fusionados en fase por un polipéptido flexible [por ejemplo(GGGGS)x3]. Este tipo de rAb es el más frecuentemente utilizado, dado que es posiblegenerar scFV específicos y con elevada afinidad contra cualquier molécula blanco mediantevarios sistemas de expresión. El objetivo de este trabajo fue generar scFv a partir dehibridomas secretores de mAb dirigidos específicamente contra el Virus de la Fiebre Aftosaserotipo A24. Para ello, inicialmente se aisló el RNA total a partir del cultivo de loshibridomas 1E12 y 4A2, disponibles en el CEVAN, que reconocen la proteína capsidalVP1 del VFA. Por medio de una reacción de RT-PCR, utilizando oligonucleótidosdegenerados, se amplificaron las porciones VH y VL que codifican para lasinmunoglubulinas murinas de cada hibridoma. Una vez definidas las secuencias VH y VL,se diseñaron 4 oligonucleótidos específicos para la construcción del scFv mediante latécnica de PCR de fusión, que permite el empalme de fragmentos de ADN en unpolinucleótido de mayor tamaño. El amplicón obtenido (800pb) fue clonado en el vectorpHEN6 entre los sitios NcoI/BstEII. Este vector incorpora el péptido señal pelB, que ladirecciona al espacio periplásmico de las células, en el extremo amino de la proteína deinterés, y una etiqueta constituida por 6 residuos de histidina, en su extremo C-terminal. Enconclusión, se lograron amplificar las regiones VH y VL de las inmunoglobulinassecretadas por los hibridomas 4A2 y 1E12. Se generaron los fragmentos scFv4A2 yscFv1E12, donde se fusionaron en fase los dominios variables H y L de cada hibridoma pormedio de un linker. Las moléculas de ADN recombinante se clonaron en un vector deexpresión procariota