CEVHAN   27013
CENTRO DE VIROLOGIA HUMANA Y ANIMAL
Unidad Ejecutora - UE
artículos
Título:
Western blot parcialmente desnaturalizante en plasmas de portadores de la mutacion V30M de transtirretina (TTR)
Autor/es:
SÁEZ, MARÍA SOLEDAD; LORENZÓN, MARÍA VICTORIA; LLANOS, MACARENA; WILDA, MAXIMILIANO; CARDINI JUAN; SORROCHE, PATRICIA BEATRIZ; PABLO R. GRIGERA
Revista:
Bioquimica y Patologia Clinica
Editorial:
Asociacion Bioquimica Argentina
Referencias:
Lugar: CABA; Año: 2019 vol. 2 p. 22 - 27
ISSN:
1515-6761
Resumen:
La transtirretina humana (TTR) es una proteína homotetramérica esencial para el transporte de ti-roxina y retinol en individuos sanos. Mutaciones puntuales, particularmente substituciones de valina por metionina en posición 30 (V30M), desestabilizan los complejos de TTR y dan lugar a la liberación de monómeros (14 Kd, TTRm), responsables de la creación de depósitos amiloideos en el intersticio de tejidos cardiacos y cerebrales. El análisis en Western inmunoblot de plasmas humanos desnatura-lizados por alta temperatura (95 C°, 10 minutos) en presencia del detergente iónico dodecyl sulfato de sodio (SDS) y utilizando anticuerpos monoclonales (Mabs) contra la molécula total o suero policlonal p71/98 dirigido contra la secuencia de aminoácidos 71 a 98 de TTR, detectan la presencia de TTRm, tanto en individuos positivos (portadores) como negativos para la mutación V30M. El suero policlonal p71/98 también identifica un polipéptido de 55-60 KD (TTRt) que corresponde a tetrámeros de TTR resistentes al tratamiento combinado de SDS y alta temperatura. El procesamiento de las muestras en presencia de SDS, pero a temperatura ambiente,(desnaturalización parcial) produce un notable incremento de TTRt y desaparición paralela de la banda correspondiente a TTRm en plasmas de individuos normales, pero no en plasma de portadores V30M-positivos, en los que TTRm continúa siendo claramente detectable. Los resultados sugieren que una simple modificación en el procesamiento de las muestras plasmáticas puede convertir al Western inmunoblot en una herramienta de utilidad para el screening de plasmas de portadores de ésta y otras mutaciones desestabilizantes de la estructura multimérica de TTR en el laboratorio clínico. Palabras clave: amiloidea, transtirretina, Western inmunoblot, plasma humano, tetrámeros