Monitoreo de los niveles de nitratos e inmunomarcación de la sintasa de óxido nítrico neuronal en ganglios de la raíz dorsal y médula espinal lumbar de ratas axotomizadas

M.F. CORONEL; M.C. DEFAGOT; M.J. VILLAR

Vaquerías, Córdoba

Taller; V Taller Argentino de Neurociencias; 2003

Se ha comprobado recientemente que el óxido nítrico (NO) participa en la neurotransmisión nociceptiva y se han observado variaciones en la expresión y actividad de la isoforma neuronal de la sintasa del óxido nítrico (NOSn), así como en los niveles de su mRNA, en diversos modelos de daño neuropático.  El objetivo del presente trabajo fue monitorear los niveles de nitratos (NO3-), productos de oxidación del NO, en ganglios y médula espinal lumbar de ratas sometidas a axotomía, y compararlos con la inmunoreactividad de la enzima NOSn en los mismos tejidos. Los animales axotomizados fueron sacrificados luego de diferentes tiempos de sobrevida (1, 3, 7, 14 y 28 días), se disecaron los ganglios L4-5 ipsi y contralaterales y la médula espinal lumbar y se determinaron los niveles de nitratos por una reacción de quimioluminiscencia utilizando el NO Analyzer (NOA) 280 de Sievers. Se procesaron asimismo ganglios y médulas de ratas controles. Paralelamente, se perfundieron animales axotomizados y los tejidos fijados fueron procesados para inmunohistoquímica convencional, utilizando un anticuerpo específico para NOSn. Se observó un aumento significativo de los niveles de nitratos tanto en ganglios como en el asta dorsal ipsilateral de la médula espinal. Las mayores concentraciones de nitratos se obtuvieron a los 7 días de sobrevida en ganglios y a los 3 días post axotomía en médula. Sin embargo, los estudios inmunohistoquímicos demostraron un aumento de la inmunomarcación para la NOSn gradual y progresivo en función del tiempo de sobrevida de los animales, alcanzándose los valores máximos el día 28 post axotomía. Este desfasaje entre los niveles de la enzima y la concentración de nitratos puede deberse a la inhibición de la enzima, por ejemplo por feedback negativo por producto final. Otra posibilidad es que el NO sea secuestrado por algún metabolito, impidiendo su normal oxidación a nitratos. Para definir estas hipótesis se medirá la actividad de la NOSn utilizando el método espectrofotométrico de la oxihemoglobina.