E2F1/BRCA1 REGULAN LA TRANSCRIPCIÓN DE ATM EN EL CÁNCER DE PRÓSTATA

MOIOLA C; DE LUCA P; MEISS R; VAZQUEZ E; DE SIERVI A

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

SAIC

Los defectos en el mantenimiento de la integridad genómica y su reparación favorecen la progresión tumoral. Se ha demostrado que mutaciones en el gen de ATM (ataxia telangiectasia mutada), una quinasa que participa en la reparación del ADN y el control del ciclo celular en respuesta al daño doble cadena en el ADN, contribuyen a un aumento en la inestabilidad genómica. Además, polimorfismos en ATM son considerados como factor de riesgo para desarrollar cáncer de próstata (PCa), viéndose incrementado aún más en individuos portadores de mutaciones del supresor tumoral BRCA1. Nuestro objetivo es comprender los mecanismos moleculares que conducen a estos desbalances y favorecen la progresión de la enfermedad. Para ello nos focalizamos en el estudio de la regulación transcripcional de ATM en líneas celulares de PCa. Mediante RT-qPCR y ensayos con genes reporteros determinamos que las proteínas BRCA1 y E2F1 co-regulan la expresión de ATM. Además, identificamos sitios putativos de unión para E2F1 en la secuencia promotora de ATM y verificamos por ChIP que BRCA1 se asocia en la región cercana al sitio de inicio de la transcripción (-0,5 Kb). Considerando que la mayoría de los agentes quimioterapéuticos inducen daño en el ADN y teniendo en cuenta el rol de ATM en la respuesta al estrés genotóxico, evaluamos el efecto de distintos agentes sobre la expresión de ATM. Determinamos que la Doxorrubicina (1uM) y su análogo, la Mitoxantrona (1uM), disminuyeron la actividad del promotor de ATM (p<0,05), mientras que el Etopósido (5uM) y el Metotrexato (200uM) no produjeron cambios significativos. Más aún, este efecto se ve incrementado en células PC3 que sobre-expresan BRCA1. Finalmente, mediante inmunohistoquímica y RT-qPCR, encontramos que la expresión de ATM en los tumores generados como xenotransplantes en ratones nude inoculados con células PC3 que tienen silenciada la expresión de BRCA1, fue significativamente menor cuando se los comparó con el control. Nuestro objetivo es comprender los mecanismos moleculares que conducen a estos desbalances y favorecen la progresión de la enfermedad. Para ello nos focalizamos en el estudio de la regulación transcripcional de ATM en líneas celulares de PCa. Mediante RT-qPCR y ensayos con genes reporteros determinamos que las proteínas BRCA1 y E2F1 co-regulan la expresión de ATM. Además, identificamos sitios putativos de unión para E2F1 en la secuencia promotora de ATM y verificamos por ChIP que BRCA1 se asocia en la región cercana al sitio de inicio de la transcripción (-0,5 Kb). Considerando que la mayoría de los agentes quimioterapéuticos inducen daño en el ADN y teniendo en cuenta el rol de ATM en la respuesta al estrés genotóxico, evaluamos el efecto de distintos agentes sobre la expresión de ATM. Determinamos que la Doxorrubicina (1uM) y su análogo, la Mitoxantrona (1uM), disminuyeron la actividad del promotor de ATM (p<0,05), mientras que el Etopósido (5uM) y el Metotrexato (200uM) no produjeron cambios significativos. Más aún, este efecto se ve incrementado en células PC3 que sobre-expresan BRCA1. Finalmente, mediante inmunohistoquímica y RT-qPCR, encontramos que la expresión de ATM en los tumores generados como xenotransplantes en ratones nude inoculados con células PC3 que tienen silenciada la expresión de BRCA1, fue significativamente menor cuando se los comparó con el control.