RESIDUOS DE N ACETIL GALACTOSAMINA Y GALACTOSA PARTICIPAN EN LA FORMACIÓN DE RESERVORIOS ESPERMÁTICOS EN EL OVIDUCTO DE LLAMA

APICHELA, SILVANA A.; JIMÉNEZ-DÍAZ, MARÍA. A.; VALZ-GIANINET, JORGE; ROLDAN-OLARTE, EUGENIA M.; MICELI, DORA C.

Buenos Aires

Jornada; I JORNADAS INTERNACIONALES DEL INSTITUTO DE INVESTIGACIÓN Y TECNOLOGÍA EN REPRODUCCIÓN ANIMAL (INITRA); 2008

INITRA

En la adhesión de los espermatozoides a las células epiteliales del oviducto moléculas tipo lectina de la membrana espermática reconocen carbohidratos específicos de la superficie oviductal. El carbohidrato involucrado es diferente según la especie. Nuestro objetivo fue caracterizar los residuos glicosilados del oviducto de llama y determinar cuál/es de estos carbohidratos participan en la adhesión oviducto – espermatozoide. Los carbohidratos de la superficie oviductal se detectaron mediante lectinhistoquímica.  Unión útero-tubal (UUT), Istmo y Ámpula, fueron fijados e incluidos en parafina. Secciones de 7um se incubaron con diferentes lectinas (WGA, WGAs, UEA 1, DBA, RCA 120, Con A, PSA, LCA, GSL  y SJA) conjugadas con FITC o Rodamina y se observaron por Microscopía Confocal Láser. Se realizaron ensayos de inhibición competitiva in vitro: espermatozoides obtenidos por vagina artificial fueron incubados 20 minutos con 10 ug/ml de glucosa, manosa, galactosa o N-acetil galactosamina en medio TL- sp. Luego se co-incubaron con explantos de células epiteliales de la UUT durante una hora y posteriormente fueron fijados, coloreados y fotografiados. Se determinó el área de cada explanto (ImagePro software) y el Índice de Unión (IU) (espermatozoides adheridos/ 0.1 mm2 de explanto). Los carbohidratos presentes son similares en Ámpula, Istmo y UUT. Se observaron abundantes residuos terminales de µ-manosa, µ- glucosa, N acetil glucosamina y ácido siálico en la superficie de la mucosa y en el citoplasma de las células epiteliales.  Galactosa y N acetil galactosamina sólo se distribuyeron en algunos sectores de la superficie de la mucosa en forma aleatoria.  No se detectó µ-Fucosa. Los IU para los tratamientos con Galactosa y N-Acetil galactosamina resultaron significativamente menores al control sin azúcar.  Al incubar espermatozoides eyaculados con N-acetil galactosamina o con Galactosa FITC-conjugadas se observó que éstos unen ambos azúcares, no así los espermatozoides epididimales. Concluimos que el sistema de reconocimiento de carbohidratos de la superficie oviductal participa en el proceso de adhesión al epitelio de la UUT, siendo Galactosa y N-Acetil galactosamina los principales azúcares involucrados en esta interacción. La molécula tipo lectina que reconoce estos azúcares sería aportada al espermatozoide por el plasma seminal durante la eyaculación.