INVESTIGADORES
APICHELA Silvana Andrea
congresos y reuniones científicas
Título:
IDENTIFICACIÓN DE PROTEINAS EN EL ESPERMATOZOIDE DE LLAMA
Autor/es:
SEQUEIRA, SABRINA; ZAMPINI, RENATO; ARGAÑARAZ, MARTÍN E; MICELI DORA C.; APICHELA, SILVANA A.
Lugar:
CABA
Reunión:
Jornada; Cuartas Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; 2014
Institución organizadora:
Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal
Resumen:
Las proteínas espermáticas participan en eventos claves relacionados a la función espermática, la interacción con el tracto reproductor femenino y la fertilización. A pesar de su importancia, el conocimiento de las proteínas espermáticas en camélidos sudamericanos es escaso. En estudios previos demostramos que el espermatozoide de llama, mediante una molécula aportada por el plasma seminal, reconoce Galactosa y N-Acetil galactosamina para adherirse al oviducto y formar reservorios espermáticos. Los objetivos son conocer el perfil de las proteínas asociadas a la membrana espermática, identificar las proteínas mayoritarias y las que tienen afinidad por N-Acetil galactosamina (NAG). Se trabajó con semen obtenido por vagina artificial de machos pertenecientes al INTA Abra Pampa (Jujuy). Los espermatozoides se obtuvieron por lavado/centrifugación con HBS. El pellet de espermatozoides se incubó con KCl 0,5 M en HBS (1 h a 4ºC) y las proteínas asociadas a la membrana espermática se recuperaron por centrifugación. El sobrenadante conteniendo las proteínas fue desalado y concentrado por centrifugación a través de filtros de acetato de celulosa 0,2 um. Luego se separaron por electroforesis en un gel de poliacrilamida (15%) y colorearon con coomassie blue coloidal. Las bandas de mayor intensidad (39, 23, 13 kDa) se identificaron por MALDI?MS como el factor de crecimiento nervioso beta (NGF-β), siendo las formas de 13 kDa la proteína madura, y de 39 y 23kDa los precursores. Para detectar las proteínas con capacidad de unión a NAG, las proteínas de un nuevo gel se inmovilizaron en membranas de nitrocelulosa y reconocieron por ligand blotting incubando con 2ug de NAG-PAA-FITC y anticuerpo anti-FITC- fosfatasa (1:10.000). Sólo una banda de 14 kDa unió NAG. Ésta sería la única proteína del espermatozoide de llama candidata a participar en la formación de reservorios espermáticos. Estudios adicionales son necesarios para determinar su identidad. Este trabajo describepor primera vez el NGF-β, presente en plasma seminal, estaría adherido a la membrana del espermatozoide, al igual que una proteína de 14 kDa con actividad de lectina por su capacidad de unir el azúcar NAG.