PERFIL DE EXPRESIÓN Y DISTRIBUCIÓN ESPACIAL DE MMP-2 EN EL OVIDUCTO DE LLAMA

ZAMPINI, RENATO; ANGIONO, G; APICHELA, SILVANA A.; LOMBARDO, D; MICELI, DORA C.; ARGAÑARAZ, MARTÍN E

CABA

Jornada; Cuartas Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; 2014

Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal

Las metaloproteasas de matriz (MMPs) son un grupo de enzimas proteolíticas que podrían estar asociadas con la fluidificación del semen, expansión de las células del cúmulo del ovocito y la interacción ovocito-espermatozoide. En estudios preliminares detectamos y secuenciamos parcialmente el ARN mensajero de MMP-2 en el oviducto de llama. Los objetivos de este trabajo fueron determinar los niveles de expresión de MMP-2 en ámpula, istmo, unión útero tubal (UUT) y papila del oviducto de llama, localizar MMP-2 en estas regiones y determinar la actividad de MMP-2 del fluido oviductal (FO). Se trabajó con oviductos de hembras no lactantes, no preñadas pertenecientes al CEA-INTA Abra Pampa (Jujuy, Argentina). El FO se obtuvo mediante perfusión de los oviductos con Tris 10 mM pH 7,4. Posteriormente los oviductos fueron separados en las diferentes regiones y procesados para obtener ARN total, o fijados en formol 10% en PBS para ensayos de inmunohistoquímica. A partir de las muestras de ARN se determinaron los niveles de expresión de MMP-2 en ámpula, istmo, UUT y papila mediante RT-qPCR. Para los estudios de inmunolocalización en el tejido se empleó un anticuerpo policlonal anti-MMP-2 producido en conejo (dilución 1:100). Finalmente la actividad proteolítica de MMP-2 se determinó mediante zimografía empleando gelatina como sustrato. Se observó expresión de MMP-2 en ámpula, istmo, UUT y papila del oviducto de llama, sin embargo no se encontraron diferencias significativas en los niveles de expresión entre regiones. La inmunomarcación se ubicó principalmente a nivel del epitelio de las diferentes regiones oviductales, y el FO mostró una banda de 62 kDa con actividad gelatinolítica consistente con MMP-2. En conjunto, los resultados indicarían que el oviducto de la llama produce y secreta MMP-2. La presencia de esta enzima en el microambiente oviductal podría sugerir su participación en los eventos reproductivos tempranos que allí se desarrollan.