INVESTIGADORES
VERA PINGITORE Esteban
congresos y reuniones científicas
Título:
IDENTIFICACIÓN GENÉTICA Y RESISTENCIA AL PROCESO DE LIOFILIZACIÓN DE LACTOBACILOS VAGINALES POTENCIALMENTE PROBIÓTICOS
Autor/es:
DE GREGORIO P.; VERA PINGITORE E.; JUÁREZ TOMÁS M. S.; NADER-MACIAS M.E.
Lugar:
Rosario
Reunión:
Simposio; 1 ER SIMPOSIO ARGENTINO DE LOS PROCESOS BIOTECNOLÓGICOS; 2010
Institución organizadora:
Universidad Nacional de Rosario
Resumen:
Introducción. En mujeres en edad
reproductiva, el mantenimiento del equilibrio ecológico del tracto vaginal, en
el cual los lactobacilos son predominantes, se considera crítico para mantener la
salud urogenital y la resistencia a infecciones. En las últimas décadas se ha propuesto el empleo de productos
probióticos conteniendo lactobacilos para la prevención o tratamiento de infecciones
del tracto urogenital femenino. Nuestro equipo de investigación
estudia las características benéficas, fisiológicas y tecnológicas de lactobacilos
vaginales (LV) para su inclusión en el diseño de productos farmacéuticos
dirigidos a reestablecer el ecosistema vaginal femenino y prevenir infecciones.
Los objetivos del presente trabajo
fueron realizar la identificación genética y evaluar la resistencia al proceso
de liofilización de LV, previamente seleccionados por sus propiedades benéficas,
relacionadas con características de superficie o producción de sustancias
antagónicas.
Metodología. Se emplearon 15 LV benéficos
preseleccionados, aislados de mujeres de Tucumán. Se realizó su identificación
taxonómica a través de la secuenciación del ADN que codifica para el ARN
ribosomal 16S (ADNr-16S). Se realizaron reacciones de polimerasa en cadena
(PCR) empleando los cebadores MLB y PLB para amplificar la región variable VI
del ADNr-16S. Las secuencias obtenidas se analizaron usando el programa BLAST
del National Center for Biotechnology Information (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST).
Para conocer su potencial aplicación tecnológica de manera que permanezcan
viables a lo largo del almacenamiento y vida de estante, se deben aplicar
diferentes metodologías. La liofilización de LV se realizó a partir de
microorganismos en fase estacionaria en caldo MRS, los que se concentraron (10X)
y resuspendieron en una mezcla lioprotectora de lactosa (12%) + leche
descremada (6%). Las suspensiones resultantes se distribuyeron en placas de
Petri (15 ml), se congelaron a -70°C
durante 24 h, y luego se liofilizaron en un liofilizador de bandeja. Se determinó el número de células viables de LV
antes y después del proceso de liofilización por el método de diluciones
sucesivas y posterior cultivo en medios agarizados.
Resultados. De los 15 LV
evaluados, la mayoría de ellos (11 cepas) se identificaron en la especie Lactobacillus gasseri. Las otras
especies identificadas fueron L.
delbrueckii subsp. bulgaricus, L. rhamnosus y L. reuterii. La resistencia al proceso de liofilizacion evidencia
que la viabilidad de los LV disminuyó en diferente grado durante el proceso, dependiendo
de la cepa ensayada. El comportamiento de las cepas de L. gasseri evidenció
diferencias estadísticamente significativas, lo que indica que la resistencia
al proceso de liofilización es una propiedad dependiente de cepa. El
microorganismo más resistente al proceso fue L. rhamnosus CRL 1332 en el
cual no se observa pérdida de viabilidad. En las cepas L. gasseri CRL 1263, L. gasseri
CRL 1307 y L. reuterii CRL 1324 la viabilidad disminuyó en una unidad
logarítmica luego de la liofilización, mientras que en el resto de los
microorganismos fue de dos o más unidades logarítmicas.
Conclusiones. La identificación
genética de LV benéficos es un requisito fundamental para los microorganismos
que se incluyan en los productos probióticos. El comportamiento de los LV
benéficos depende de cada cepa en particular, y no está asociado a género o
especie. Los resultados obtenidos permiten avanzar en la selección de los
microorganismos más adecuados para su inclusión en el diseño de un producto
probiótico de aplicación vaginal.