Clonado, expresión, purificación y análisis de alérgenos de soja.

CANDREVA A; CURCIARELLO R; PETRUCCELLI S; DOCENA G

Rosario, Santa fe Argentina

Congreso; REDBIO 2009; 2009

Se conocen más de 16 proteínas de soja que muestran reactividad frente a inmunoglobulinas E humanas, cuya identidad como alergenos no ha sido aún demostrada. Es importante la identificación y caracterización de los alérgenos relevantes en soja para entender los mecanismos moleculares de alergia a soja, que permitan crear herramientas de diagnóstico y terapias para dicha enfermedad. El objetivo de este trabajo fue clonar y expresar en bacterias algunos de los posibles alergenos de soja con el fin de analizar, en primera instancia, su reconocimiento por sueros de pacientes alérgicos de la población argentina.A partir de una biblioteca de cDNA de semillas inmaduras de soja se amplificaron por PCR los genes codificantes para Gly m Bd 30K (p34), Gly m Bd 28K (p28), Gly m conglicinina alfa,  deleciones de alfa y Gly m glicinina G4. Estos genes fueron clonados empleando el sistema Gateway (Invitrogen), cuyos vectores permiten la fusión a la maltose-binding protein (MBP) y a un Tag de histidinas, para facilitar la purificación de las proteínas recombinantes. Los plásmidos fueron introducidos en diferentes cepas de E. coli, optimizándose las condiciones de inducción y purificación.Se comprobó la reactividad cruzada de Gly m conglicinina alfa y sus deleciones con proteínas de leche bovina mediante Western-blots utilizando sueros policlonales  anti-leche vacuna obtenidos en cabra y conejo, y anticuerpos monoclonales específicos de caseínas bovinas.Mediante ELISA indirecto con sueros de pacientes argentinos alérgicos a soja se determinó la reactividad Ig E específica de las proteínas de soja recombinantes p34 y p28.