IPATEC   26054
INSTITUTO ANDINO PATAGONICO DE TECNOLOGIAS BIOLOGICAS Y GEOAMBIENTALES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación de una PCR de punto final y dos métodos de extracción de ADN para el diagnóstico de brucelosis ovina
Autor/es:
HOMSE, M.; ROBLES C. A.; ALVAREZ L. P.
Reunión:
Congreso; XXII Reunión Científico-Técnica de la Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorios de Diagnóstico; 2018
Resumen:
La brucelosis ovina es una enfermedad crónica causada por Brucella ovis que genera epididimitis e infertilidad en carneros y abortos en ovejas, produciendo un impacto negativo sobre la producción de la majada. El cultivo bacteriológico es el método considerado estándar de oro, sin embargo presenta ciertas limitaciones para su uso en el diagnóstico de rutina como el tiempo que demanda hasta obtener un resultado final y la posible contaminación de las muestras, entre otros. En los últimos años, se ha intentado mejorar el diagnóstico de la enfermedad mediante el desarrollo de técnicas basadas en biología molecular, como la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). El objetivo de este estudio fue evaluar una PCR de punto final para B. ovis sobre muestras de semen de carneros, utilizando dos métodos de extracción de ADN, y compararla con el cultivo bacteriológico.El diseño de PCR fue óptimo para la amplificación del fragmento de ADN de B. ovis elegido como cebador, logrando ser específico y con un buen nivel de detección de ADN de B. ovis. Las diferencias observadas en los porcentajes de sensibilidad y especificidad diagnósticas para cada PCR, podrían estar relacionadas al método de extracción de ADN utilizado. En la PCR-FC, la menor especificidad diagnóstica con respecto a la PCR-CH podría deberse a contaminaciones durante las extracciones de ADN de las muestras, debido a los múltiples pasos de transferencia y descarte que implica el proceso de extracción con Fenol-Cloroformo. Por otro lado, la menor sensibilidad diagnóstica obtenida en la PCR-CH podría deberse a problemas de inhibición de la PCR, ya que se obtiene un ADN de menor calidad con este método respecto al de Fenol-Cloroformo. Según Manuja y col. (2010), el semen posee células espermáticas y no espermáticas que pueden inhibir la PCR, y bioquímicamente está compuesto por una gran cantidad de ADN y proteínas, por lo que el método de extracción elegido es importante para obtener ADN de buena calidad y así contribuir al éxito de la PCR.Ambas PCRs podrían utilizarse como técnicas diagnósticas complementarias al cultivo bacteriológico para abordar el diagnóstico de la brucelosis ovina. Sin embargo, si se tiene en cuenta el tiempo y costos requeridos para cada método de extracción de ADN, se sugiere optar por el método de Chelex, que si bien se debe seguir desarrollando para mejorar su sensibilidad, permite una extracción más rápida y más económica.