OPTIMIZACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DE LA PROTEÍNA TAU HUMANA RECOMBINANTE EN ESCHERICHIA COLI

LOPEZ S; SOCIAS, S.B.

Congreso; XIX Jornadas de Jóvenes Investigadores Augusto Palavecino. UNT 2018; 2018

Universidad Nacional de Tucumán

El Alzheimer es una enfermedad neurodegenerativa caracterizada a nivel histopatológico, entre otras cosas, por marañas neurofibrilares intracelulares formadas por proteína Tau anormalmente fosforilada. Nuestro grupo de trabajo se encuentra abocado al estudio de la acción de ciertos inhibidores sobre la agregación patológica de Tau, pero la disponibilidad de la proteína pura limita marcadamente el avance de nuestras investigaciones. El objetivo de este trabajo fue incrementar el rendimiento de la producción de la proteína humana Tau en E. Coli.Se analizó la producción de Tau en E. Coli Rosetta, mediante transformación con el plásmido contenedor del gen de Tau, y posterior expresión.Se realizaron ensayos para determinar la formación de cuerpos de inclusión, tratando los mismos para disolverlos. Se compararon los resultados con el proceso realizado a 30°C, para determinar si la T influía en la formación de dichos cuerpos de inclusión.Se analizó también, el efecto de la adición de etanol al medio de cultivo donde se llevó a cabo la producción rutinaria.El efecto de cada una de las condiciones ensayadas sobre el rendimiento de Tau se determinó por densitometría partir de geles SDS.Determinamos que la presencia de codones raros en el gen de Tau tiene influencia sobre su producción, cesando la misma al expresar en Rosetta.La presencia de Tau en los pellets sin tratar y en los tratados, confirma que el bajo rendimiento de producción se debe en parte al paso de la proteína a la fracción insoluble, tanto a 37°C como a 30°C sin disminución significativa en la formación de cuerpos de inclusión a menor T.Se determinó que la presencia de etanol aumenta casi 3 veces la expresión de la proteína.Se lograron establecer las condiciones que suponen un mayor rendimiento en la producción de Tau: 37°C-6hs-3%etOH, donde se observa una mayor proporción de proteína soluble, correspondiente a una menor aparición de cuerpos de inclusión disueltos.