Optimización de marcadores moleculares para la identificación de Ceratium spp.

ACCATTATIS, VICTORIA; RUEDA, EVA CAROLINA; DEVERCELLI, MELINA

Santa Fe

Encuentro; Reunión de comunicaciones científicas; 2017

Las modificaciones antrópicas de los ecosistemas acuáticos favorecen la proliferación de microorganismos nocivos o invasores que pueden ocasionar alteraciones en la biodiversidad y el funcionamiento ecosistémico. Las especies de dinoflagelados Ceratium furcoides y C. hirundinella comenzaron a dispersarse en ambientes de Chile, Brasil y Argentina en la década del 60 y su proliferación va en aumento. Recientemente se detectó la presencia de C. furcoides en lagunas de la llanura aluvial del río Paraná. Para un estudio más exhaustivo de esta especie, los marcadores moleculares son herramientas útiles para caracterizar la diversidad de los recursos genéticos y buscar variantes funcionales de determinados genes. Por este motivo, el objetivo general de este trabajo fue generar un conjunto de marcadores moleculares optimizados para identificar y realizar estudios filogeográficos de Ceratium spp. que permitan entender la dispersión de sus poblaciones.A partir de muestras de fitoplancton colectadas en septiembre de 2015 en ambientes del sistema del río Paraná, se aislaron 20 ejemplares de Ceratium de cada una utilizando el microscopio óptico. Se eligieron 5 marcadores para trabajar, cuatro de ellos fueron utilizados previamente en la bibliografía con otros dinoflagelados y se diseñó un par de primers para un quinto marcador. Se extrajo ADN genómico y se optimizó la amplificación de los marcadores utilizando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). De todos los marcadores estudiados, se obtuvieron resultados con los primers PP 18S-431F y PP 18S-987R utilizando Nested-PCR, a partir de la cual se obtuvo un fragmento de 500 pb que se envió a secuenciar. Los resultados mostraron que se podría usar este marcador molecular para describir e identificar las especies de Ceratium. No obstante, el resultado de la secuenciación mostró una superposición de nucleótidos, y el hecho de que los individuos presentaran varias secuencias distintas, muestra una variabilidad genética importante que debe ser estudiada para poder entender la dispersión de esta especie. La complejidad de la muestra hace que sea imposible hacer estudios individuales por lo que estos resultados serán utilizados para la implementación de la tecnología de NGS (Next Generation Sequencing) a los fines de caracterizar la diversidad de Ceratium de distintas muestras ambientales del sistema fluvial del Paraná.