La activación de Nrf2 por el Compuesto A (CpdA) protege a las células-b de la injuria inflamatoria mediada por citoquinas

ASSAD, JUAN MANUEL; SÉTULA, CAROLINA; SÉTULA, CAROLINA; ANDREONE, LUZ; PERONE, MARCELO JAVIER; ANDREONE, LUZ; PERONE, MARCELO JAVIER; ASSAD, JUAN MANUEL

Congreso; XXII Congreso Argentino de Diabetes; 2020

Sociedad Argentina de Diabetes

Introducción: El desarrollo del proceso autoinmune durante la diabetes tipo 1 (DM1) contribuye a la insulitis; en este contexto, el estrés de las células-β y su posterior deficiencia en la secreción de insulina preceden a los signos clínicos de la enfermedad. La hiperglucemia desencadena la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) mitocondriales que superan la capacidad antioxidante de las células-β conduciendo al estrés oxidativo. El microambiente inflamatorio del islote contribuye a la activación del estrés oxidativo y de retículo endoplásmico (RE) resultando en la disfunción y muerte de las células-β. El factor de transcripción Nrf2 regula la expresión de genes citoprotectores en respuesta al estrés oxidativo, su inducción es necesaria para la fisiología normal de la célula-β. Hemos reportado que el CpdA regula células inmunes clave en la respuesta inmune e inflamatoria y en la insulitis, linfocitos T y células dendríticas. También, observamos que el CpdA disminuye el estrés de RE inducido por citoquinas inflamatorias (IL-1+IFN-; CYT) en células-β y que la administración in vivo del CpdA retarda la aparición de hiperglucemia en un modelo murino de diabetes autoinmune. El desarrollo de nuevos agentes con acción anti-inflamatoria e inmunomoduladora y potencial protector dirigido a la señalización disfuncional de las células-β posee interés clínico en la diabetes.Objetivos: Explorar el efecto del CpdA sobre la vía de señalización de Nrf2 y el estrés oxidativo inducido por CYT en las células-β.Materiales y Métodos: Como modelo experimental utilizamos la línea celular de insulinoma de rata (INS-1E). Fórmula química del CpdA: cloruro de 2-(4-acetoxifenil)-2-cloro-N-metil-etilamonio. Se utilizó un plásmido reportero (ARE-LUC) para la evaluación de la actividad transcripcional de Nrf2 (luminometría); RT-qPCR (Sybr Green) para el análisis de la expresión de ARNm; WB para el análisis de la expresión de proteínas; kit comercial basado en DCFDA para evaluar ROS (fluorometría); análisis de viabilidad celular por MTT y ELISA para insulina.Resultados: El CpdA (10μM) estimuló la actividad transcripcional de Nrf2 induciendo la expresión del ARNm de enzimas antioxidantes (NQO1, HMOX-1 y Txnrd1) en células INS-1E (p