VHHs específicos para HA de PR8, presentan efecto profiláctico contra la infección con el aislamiento argentino H1N1 A/Argentina/017/2009 adaptado al ratón.

BARBIERI, E.S.; BAUMEISTER, E.; PUNTEL, M.; SOSA HOLT, C; ASENZO, G.; WIGDOROVITZ, A.; BAZTARRICA, J.; IBAÑEZ, ITATI; PARREÑO, V.

Vaquerías - Córdoba

Jornada; XXXVIII REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE VIROLOGÍA; 2018

RAM

VVHHs específicos para HA de PR8, presentan efecto profiláctico contra la infección con el aislamiento argentino H1N1 A/Argentina/017/2009 adaptado al ratón.El virus Influenza tipo A pertenece a la familia Orthomyxoviridae, posee un genoma ARN de 8 segmentos y una alta capacidad de mutagénesis debida a los conocidos fenómenos de cambios genéticos y reasociación génica generan la necesidad de complementar la formulación de las vacunas con terapias neutralizantes. Los nano-anticuerpos (VHHs) son moléculas derivadas de anticuerpos presentes en llamas, que se presentan como herramientas atractivas para su administración en tratamientos de inmunidad pasiva dado su bajo peso molecular (15kDa) y alta afinidad, especificidad, estabilidad y solubilidad.Previamente hemos descripto 13 clones de VHHs específicos contra la proteína recombinante HA0 de la cepa viral H1N1 A/Puerto Rico/8/1934 (PR8) que reconocen in vitro, en forma específica tanto a un aislamiento argentino de la cepa pandémica (H1N1 A/Argentina/017/2009) (Pdm09) como a la cepa PR8 adaptado al ratón (PR8m). En el presente trabajo informamos la adaptación a ratón de H1N1Pdm09 (Pdm09M); la capacidad neutralizante observada in vitro para 5 VHHs, y la eficacia profiláctica observada in vivo de los VHHs E13 y G41 frente al desafío viral con la cepa Pdm09M, en ratones Balb/c hembra de 6 semanas. En cada pasaje se titularon los homogenatos de pulmón por infección sobre células MDCK, tomando para el siguiente pasaje, la muestra de mayor título. La inoculación se realizó vía intranasal (in) con 50μl/animal, bajo anestesia intraperitoneal (ip) con xilacina-ketamina (5-50 mg/kg). En el pasaje 7 el título viral promedio observado fue de 1x109,36 DICT50/ml, en el 4 día post-infección (dpi). Se generó un stock viral de trabajo. Se detectó una DL50/50μl de 1x10-3,5, y un descenso del 30% en 6/6 animales, a 7 dpi. La eficacia profiláctica de los VHHs fue probada post-inoculación in con 4DL50/50μl de la cepa Pdm09M, 4 horas post-tratamiento. Los tratamientos consistieron en la administración in de E13 o G41 (100μg/animal) (n=6), como controles negativos un grupo tratado con PBS y un grupo tratado con un VHH no relacionado (VHH-NR)(VHH contra Norovirus, 100μg/animal), como control positivo un grupo tratado con suero hiperinmune de ratón inmunizado con Pdm09. A los 4 dpi, no se observo título infeccioso en el grupo tratado con E13 lo que muestra su alta efcicacia porfilactica, mientras que el grupo G41 mostraron titulos virales al igual que los grupos PBS, como el VHH NR. Los titulos virales observados fueron: 1x107,44 DICT50/ml en el grupo PBS, 1x106,91 DICT50/ml en el grupo VHH-NR, y 1x101,25 DICT50/ml en el grupo tratado con suero policlonal. Se observo un descenso máximo de peso a los 7 dpi tanto en el grupo PBS como el grupo VHH-NR. El grupo G41 presentó un título de 1x104,66 DICT50/ml, sin embargo, al igual que el grupo E13, no se detectó descenso de peso lo que podria sugerir que pdria ser aplicado para la terapeutica. Asimismo, nuestros resultados reforzarian la hipotesis de un potencial cambio en la secuncia de HA0 ocurrido durante el proceso de adaptación del virus al ratón.