Capacidad neutralizante contra la cepa H1N1 PR8m de nanoanticuerpos HA0 específicos.

PUNTEL, M.; BAUMEISTER, E.; GARAICOECHEA, L.L.; SOSA HOLT, C; WIGDOROVITZ, A.; ASENZO, G.; BAZTARRICA, J.; PARREÑO, V.; IBÁÑEZ, ITATÍ; BARBIERI, E.S.; PUNTEL, M.; BAUMEISTER, E.; GARAICOECHEA, L.L.; SOSA HOLT, C; WIGDOROVITZ, A.; ASENZO, G.; BAZTARRICA, J.; PARREÑO, V.; IBÁÑEZ, ITATÍ; BARBIERI, E.S.

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

Asociación Argentina de Microbiología

El virus Influenza tipo A posee genoma ARN de 8 segmentos ypertenece a la familia Orthomyxoviridae. Los fenómenos de cambios genéticos yreasociación de los genomas segmentados generan la necesidad de complementar laformulación de las vacunas con terapias neutralizantes. Los nano-anticuerpos(VHHs) son moléculas derivadas de anticuerpos presentes en llamas monoclonalesy debajo peso molecular (15kDa), alta afinidad, especificidad, estabilidad ysolubilidad, por lo que se presentan como herramientas atractivas para suadministración en tratamientos de inmunidad pasiva. Previamente hemos descriptoclones de VHHs seleccionados específicos contra la proteína recombinante HA0 dela cepa viral H1N1 A/Puerto Rico/8/1934 (PR8) y también reconocenespecíficamente un aislamiento argentino de la cepa pandémica (H1N1A/Argentina/017/ 2009) (H1N1Pdm). En el presente trabajo presentamos lacapacidad neutralizante observada in vivo de los clones G41.2 y E13.2 frente aldesafío viral en el modelo ratón. Se utilizó la cepa de referencia de tipo Amurinizada (A/H1N1 Puerto Rico/8/1934, PR8m), dosis 2DL50/50ul administrada porvía intranasal (in). Se introdujeron dos grupos control: CNeg de animalestratados con PBS e infectados con virus PR8m, y CPos de animales tratados conun suero policlonal de ratón inmunizado con H1N1Pdm. El ensayo deneutralización profiláctica se realizó mediante la administración in de VHHs,4hs antes de la infección viral: G41.2 100ug y G41.2 200ug; y E13.2 100ug,E13.250ug y E13.2 25ug (en 50ul de PBS - 1% BSA) (n=5). Se realizó elseguimiento de peso de los animales desafiados durante 14 días; tanto como elanálisis de título viral infeccioso en homogenato de tejido pulmonar, 4 díaspost-infección (dpi). Los resultados observados indican una reducción en eltítulo infeccioso en los animales tratados con VHHs respecto de los controlesde PBS que se condice con la disminución de peso observada: grupos E13.2 100ugy E13.2 50ug con títulos virales menores a 1UHA/ml; grupos tratados con suerohiperinmune de ratón, G41.2 100ug y G41.2 200ug mostraron títulos viralesmayores a 3UHA/ml; y el grupo CNeg mostro títulos mayores a 6UHA/ml. Losresultados presentados reforzarían la caracterización bioquímica y funcional delos clones E13.2 y G41.2 anteriormente presentada en cuanto al epitope blancode interacción. Por un lado, E13.2 mostro capacidad neutralizante frente a H1N1PR8m aun utilizando 50ug de VHH, además de neutralizar a H1N1Pdm lo que setrataría de un anticuerpo neutralizante dirigido al tallo de la proteína HA0.Por otro lado, G41.2 no logro neutralizar a PR8m mientras que si a H1N1Pdm, ylogra inhibir la hemaglutinación; por lo que estaría interactuando con lacabeza de la HA0. Pese a haber sido inicialmente seleccionado con HA0 de PR8recombinante el epitope especifico se habría perdido en el proceso demurinización de la cepa. Esto último será confirmado por comparación desecuencias entre HA0 recombinante y HA0 de PR8.