IQUIBA-NEA   25617
INSTITUTO DE QUIMICA BASICA Y APLICADA DEL NORDESTE ARGENTINO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Nueva estrategia en la producción de anticuerpos anti-Bothrops alternatus
Autor/es:
LÓPEZ, GISELA; VAN DE VELDE, A.;; FUSCO, L; LEIVA, LAURA C
Lugar:
Resistencia
Reunión:
Jornada; XXV Comunicaciones Cientificas y Tecnologicas - 2019; 2019
Institución organizadora:
Secretaria General de Ciencia y Técnica - Universidad Nacional del Nordeste
Resumen:
Los accidentes ofídicos constituyen un importante problema de salud pública. El único tratamiento es la aplicación de antivenenos, constituidos porinmunoglobulinas purificadas de sueros / plasma de animales de gran porte, inmunizados previamente con dosis subletales del veneno. Persiguiendoel bienestar del animal productor, se han realizado trabajos con el fin de disminuir la toxicidad de los venenos y, de esta forma reducir el impacto queproducen sus toxinas en el sitio de la inoculación y aliviar el sufrimiento del animal huésped. En este sentido los venenos fueron tratadostérmicamente, desintoxicados con aldehído, expuestos a foto-oxidación y radiaciones, incluso adsorbidos en tanino o yodo. Sin embargo, la alteraciónde la antigenicidad del veneno se puede ver afectada. El género Bothrops en uno de los principales causantes de los accidentes ofídicos del nordesteargentino. Bothrops alternatus induce alteraciones tisulares locales, esencialmente hemorragia, daño muscular, inflamación, entre otros. Estos efectospatológicos se deben, principalmente, a la acción concomitante de las metaloproteinasas (SVMPs). Si bien estudios proteómicos mostraron la presenciade mas de 50 tipos de proteinas en la composición de su veneno, el bloqueo de sus SVMPs practicamente anula los efectos fisiopatológicos que estasecreción induce. En razón de estas observaciones, en este trabajo, se propuso el desarrollo de un protocolo de inmunización alternativo. Para el mismose utilizó como antígeno el veneno de B. alternatus bloqueado en sus metaloproteinasas, a través del uso del agente EDTA-Na2, en busca de reducirel daño orgánico sin afectar la estructura antigénica que ha desencadenar la respuesta inmune. Para esta propuesta, la acción proteolítica delveneno de B. alternatus (10 mg / mL) se inhibió con EDTA-Na2 (10 mM, V- EDTA-Na2) y se usó como antígeno. Previo a la inoculación en animales seeliminó el excedente del agente quelante, mediante exclusión molecular (Sephadex G-25), y se constató la neutralización efectiva de las SVMPs, sobreazocaseína. Grupos de 5 ratones (Balb/c) se inmunizaron por vía subcutánea los días 0, 15 y 30 con V (15-30-45 ug) o V-EDTA-Na2 (45-90-135 ug)emulsionados con Adyuvante de Freund (completo e incompleto, según corresponda). Las dosis fueron seleccionadas siguiendo lasrecomendaciones de la Organización Mundial de la Salud (OMS). Las muestras de sangre se recogieron de la punta de la cola de los animales (días14, 29 y 41), las cuales fueron destinadas a los Ensayos de ELISA. En el día 50, al finalizar los planes de inmunización, se tomaron muestras de sangresin anticoagulante. El suero obtenido fue destinado a realizar ensayos de ELISA y inmunotransferencia, con el fin de cuantificar la respuesta inmunede los animales y evaluar su capacidad de reconocer los componentes del veneno entero. Además se realizaron pruebas de neutralización de laactividad proteolítica y fosfolipásica del veneno, con el fin de comprobar la capacidad bloqueante de los sueros. Los resultados mostraron que losanimales inmunizados con V-EDTA-Na2 presentaron un título más alto (5.1x104) que los tratados con V (1.3x104), producto de la inmunización conmayores dosis de veneno bloqueado. En el ensayo de Western Blot se observó que los sueros, tanto de aquellos animales inmunizados con veneno(SV) como los sometidos a V-EDTA-Na2 (SVE), tienen la capacidad de reconocer las proteínas de dicha secreción ofidica. Por último se comprobó lacapacidad neutralizante de los antivenenos, reportandose en ambas actividades, proteolítica y fosfolipásica, una neutralización significativamentesuperior (p < 0,05) por parte del SVE. En conclusión, el bloqueo de las metaloproteinasas del veneno de B. alternatus, con el agente quelante EDTANa2,no afectó las propiedades antigénicas de esta secreción ofídica. Además, la ausencia de actividad por parte de las SVMPs, permitió inocular unamayor carga proteica de veneno sin afectar al animal y a la vez inducir un mayor titulo de los anticuerpos producidos. Estos resultados sentan basepara el desarrollo de antivenenos mediante planes de inmunización menos lesivos para el animal conservando la calidad del inmunobiológico a producir.