ACCIÓN CITOTÓXICA DEL EXTRACTO DE ASTRAGALUS GARBANCILLO SOBRE CULTIVO DE CÉLULAS GLIALES

TORRES, ANA M.; PISTAN, MA ELENA; CHOLICH, L; BUSTILLO, SOLEDAD

Corrientes

Jornada; XIV Jornada Internacional de Ciencia y Tecnología y XII Jornada de Becarios y Tesistas de la Facultad de Odontología de la Unne; 2019

Facultad de Odontología. UNNE

Astragalus garbancillo es una planta tóxica hallada en el Noroeste Argentino y causa una enfermedad de almacenamiento lisosomal adquirida en los animales. La ingestión crónica ocasiona severos disturbios neuronales. El principal tóxico es un alcaloide indolizidínico llamado swaisonina (SW), quien inhibe a la α-manosidasa lisosomal, lo cual provoca alteración de la función y muerte celular. Las células gliales tienen un papel muy importante en el funcionamiento del SNC. Como consecuencia del daño neuronal, estas células tienen la capacidad de responder con cambios morfológicos o funcionales. El objetivo del trabajo fue desarrollar un cultivo primario de células gliales y evaluar la citotoxicidad inducida por el extracto de Astragalus garbancillo. Se utilizaron cerebros de ratones de la cepa CF-1 (1-3 días de vida). Las meninges fueron extraídas e inmediatamente se realizó una disociación mecánica del tejido y seguidamente se centrifugó a 1.000 rpm durante 5 minutos a 4°C. Las células se sembraron en frascos de cultivo, previamente tratados con Poly-d-lisina, en medio DMEM-F12 suplementado con 10% SFB, MEM NEAA, L-glutamina y antibióticos, incubándose en atmósfera húmeda a 37°C y 5% CO2. Al día 21 de cultivo, las células adheridas fueron recuperadas por tripsinización (EDTA-0,25%) y sembradas en una placa de 96 wells (3x104 cél/well). Luego de 24h, el cultivo se expuso al extracto de la planta (500 y 250 μg/ml) por 48 h. La viabilidad celular fue cuantificada por medio de la tinción con cristal violeta y la citólisis mediante la liberación al medio de la enzima citoplasmática lactato deshidrogenasa (LDH). El extracto produjo una disminución dosis dependiente en la viabilidad celular, siendo del 40% en las células expuestas a la mayor dosis. Se comprobó además que este extracto indujo daño de las membrana celulares al detectarse un incremento de la LDH, 2.5 y 12 veces más que el control con 250 μg/ml y 500 μg/ml respectivamente. Estos resultados demuestran el efecto citotóxico del extracto sobre las células gliales.