IQUIBA-NEA   25617
INSTITUTO DE QUIMICA BASICA Y APLICADA DEL NORDESTE ARGENTINO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Expresión de metaloproteinasas de matriz en células de Carcinoma Renal de Células Claras y su relación con la hipoxia tumoral
Autor/es:
AGUIRRE, MARÍA VICTORIA; PALOMAR, LUCAS SEBASTIÁN; GAY, CLAUDIA CAROLINA ; BARNES, TAMARA ELIANA; RODRÍGUEZ, JUAN PABLO
Lugar:
Resistencia
Reunión:
Jornada; XXV Comunicaciones Científicas y Tecnológicas de la Universidad del Nordeste; 2019
Institución organizadora:
Secretaria General de Ciencia y Técnica de la Universidad Nacional del Nordeste
Resumen:
La proteólisis extracelular es uno de los principales mecanismos transformantes del microambiente tumoral. Las enzimas que la catalizan se denominan metaloproteinasas de la matriz (MMPs). Como resultado de recientes estudios han sido asociadas con tumorigénesis y la migración de células cancerosas y, su elevada expresión, ha sido relacionada con la hipoxia tumoral en numerosos carcinomas. Dado este importante rol que cumplen en la biología tumoral se convirtieron en blancos potenciales para el desarrollo de nuevos fármacos. Pese a esto, escasos son los estudios realizados en el Carcinoma Renal de Células Claras (CRCC) el cual por sus características moleculares manifiesta, en un 90% de los casos, un fenotipo celular hipóxico. Dada la necesidad de nuevo conocimiento que permita una mayor compresión de la biología molecular del CRCC, el objetivo de este trabajo consistió en caracterizar la expresión y actividad de MMPs en líneas celulares bajo condiciones de hipoxia. Se utilizaron células Caki-1 y Caki-2 derivadas de CRCC y la hipoxia se generó químicamente tratando los cultivos (80-90% de confluencia) por 24 h con CoCl2 100 y 300 μM disuelto en medio de cultivo en ausencia de suero fetal bovino (SFB). Se recogieron los sobrenadantes y se concentraron, se estudiaron los perfiles electroforéticos de los mismos por SDS-PAGE 12% y se midió su actividad gelatinolítica por zimografía. La expresión de MMPs en los mismos se determinó por western blot (WB). Las bandas de degradación (zimografía) y las de inmunodetección (WB) fueron analizadas con el software de imágenes Image J, para el correspondiente análisis densitométrico. La expresión de la cadena α del Factor inducible por Hipoxia (HIF 1 y 2) fue estudiada por RT-qPCR a fin de validar el modelo de hipoxia celular. Se observó un aumento significativo en la expresión de la isoforma alpha de HIF-2 (mediador de la adaptación celular a hipoxia) en los tratamientos respecto a los controles, en ambas líneas celulares. Las bandas que presentaron actividad gelatinolítica se observan a la altura de 72 kDa y, una menos intensa de 103 kDa, en ambas líneas celulares. Aumentando la cantidad de proteína de siembra (30 µg) en zimografía se observó la aparición de nuevas bandas de degradación de baja intensidad, además de las previamente descritas. Mediante Western Blot fue posible identificar tres isoformas de metaloproteinasas, MMP-7, MMP-8 y MMP-21 en los sobrenadantes celulares de ambas líneas. Diferencias significativas fueron halladas sólo en los distintos tratamientos en la línea Caki-1, para los tratamientos con 100 μM para la MMP-7, 300 μM para la MMP-8 y 300 μM para la MMP-21. Si bien estas diferencias no fueron consistentes en todos los tratamientos, la importancia de estos resultados preliminares radica en la reciente relevancia que han cobrado las MMPs en la biología del cáncer. La detección de estas tres isoformas en las líneas Caki-1 y Caki-2 sometidas a condiciones de hipoxia química, las ubican en el foco de posteriores estudios, debido a su participación en múltiples procesos reguladores del microambiente tumoral, actuando como potenciadoras de la actividad proteolítica (MMP-7), acción pro-inflamatoria (MMP-8), y por su expresión relacionada con la invasión, histotipos y tamaño tumoral (MMP-21), encontrándose actualmente en el foco de numerosas investigaciones.