IQUIBA-NEA   25617
INSTITUTO DE QUIMICA BASICA Y APLICADA DEL NORDESTE ARGENTINO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Purificación de una tripsina a partir del extracto de visceras de Surubí (Pseudoplatystoma corruscans)
Autor/es:
BUSTILLO, SOLEDAD; SÁNCHEZ, SEBASTIAN; VAN DE VELDE, ANDREA; LEIVA, LAURA
Lugar:
Resistencia
Reunión:
Encuentro; XXV Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas de la UNNE; 2019
Institución organizadora:
Universidad Nacional del Nordeste
Resumen:
En los últimos años ha cobrado importancia el estudio y uso de proteasas, alcanzando valores superiores al 50% de las ventas de enzimas a nivelindustrial. Actualmente es de interés ampliar la variedad de esta clase de enzimas, destacándose aquellas con propiedades únicas. Por esta razónha aumentado el estudio de nuevas fuentes de proteasas, siendo los peces una de ellas. Puntualmente, las vísceras de estos animales son unafuente rica en enzimas digestivas, tales como tripsina, pepsina, quimotripsina, colagenasas y elastasa. Es importante resaltar que las víscerasconstituyen el desecho mayoritario del procesamiento de los pescados (5 % del peso) y que, descartadas al medio, pueden inducir problemasambientales.Particularmente, la tripsina tiene un alto valor comercial y es de uso muy difundido tanto en investigación científica como en industrias agroalimentarias,químicas, farmacéuticas y curtiembres. Su aplicabilidad en numerosos procesos biotecnológicos deriva de su estabilidad y actividad en condicionesadversas, tales como en presencia de tensioactivos y agentes oxidantes.El Nordeste Argentino cuenta con especies ictícolas nativas cultivadas en diferente grado de desarrollo, tales como pacú, surubí, dorado, boga, ysábalo. De la producción acuícola total, superior a 3300 tn, aproximadamente 74 tn corresponden a las especies de surubí (P. fasciatum y P.coruscans) cuyo cultivo ha venido incrementándose en forma sostenida en los últimos años, y con ello los producto de descarte resultado delprocesamiento de los animales. Con esta perspectiva, el objetivo de este trabajo fue aislar tripsina, mediante un protocolo sencillo, a partir de víscerasdel surubí (P. coruscans) y evaluar su estabilidad frente a agentes surfactantes. Para ello, se preparó un extracto a partir del tejido mesentéricopresente en el estómago y duodeno del surubí, área donde se localiza el páncreas difuso en esta especie, productor de tripsinógeno. El mismo seactivó por incubación (120 h a 4°C), y posteriormente se sembró en una columna de Benzamidina Sepharosa, para la purificación en etapas (variando elpH) de la enzima de interés. Una vez purificada se estimó su masa molecular y se evaluó el comportamiento de la tripsina, sobre el sustrato BApNA(Nα-Benzoil-L-arginina 4-nitroanilida hidroclorida), en presencia de inhibidores (STBI, EDTA, PMSF) y agentes surfactantes (Triton X-100,Tween 20 y Tween 80). Los resultados mostraron que el tripsinógeno presente en el extracto alcanza su activación completa a las 72 h de incubación.Así, se logró purificar una proteína con actividad sobre BApNA, de masa molecular de 30 kDa, compatible con Tripsina. Al incubar esta enzima con losdiferentes inhibidores, la actividad de la misma fue bloqueada totalmente por STBI (1mg/mL), mientras que PMSF (1mM) y EDTA (2mM) noexhibieron efecto alguno, lo que confirma la naturaleza de tipo tripsina de la proteasa aislada. Por otro lado, teniendo en cuenta el uso industrial deproteasas como aditivos en detergentes, se estudió la compatibilidad de la tripsina de surubí con diferentes agentes surfactantes. Los resultadosevidenciaron que esta enzima se ve afectada por la presencia de estos agentes, disminuyendo su actividad en un 25, 63 y 90% en presencia de TritónX-100, Tween 20 y Tween 80, respectivamente.En conclusión, se logró purificar, a partir del extracto de vísceras de surubí, una enzima con actividad tripsina, de masa molecular estimada de 30 kDa.Para considerar el potencial uso de esta tripsina en lavandería se requieren estudios centrados en la estabilidad de la enzima evaluándose un mayorrango de concentraciones de detergentes, resultando prometedor el tritón X-100.