IQUIBA-NEA   25617
INSTITUTO DE QUIMICA BASICA Y APLICADA DEL NORDESTE ARGENTINO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la influencia del pH en la actividad y estabilidad de un extracto gástrico con actividad pepsina de surubí
Autor/es:
GOMEZ, GABRIELA; NERLI, BIBIANA; LEIVA, LAURA CRISTINA; ACEVEDO G, ANTONELLA; BUSTILLO, SOLEDAD
Lugar:
Resistencia
Reunión:
Jornada; XXV Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2019; 2019
Institución organizadora:
Universidad Nacional del Nordeste
Resumen:
La piscicultura es el rubro de producción animal con mayor crecimiento en el mundo. En el Nordeste Argentino se cultivan especies ictícolas nativascomo el surubí (P. fasciatum y P. coruscans), cuyo desarrollo ha venido incrementándose en forma sostenida en los últimos años. La explotación deestos recursos genera subproductos (vísceras, piel, etc) que son utilizados para generar productos de bajo valor agregado (harina/aceite de pescado)o bien descartados originando problemas ambientales.Las enzimas son catalizadores biológicos altamente específicos capaces de aumentar la velocidad de las reacciones químicas. Estas característicasresultan muy útiles para diferentes aplicaciones industriales, y en particular las proteasas se encuentran entre las enzimas más utilizadas en laindustria (50-60%). En los últimos 20 años se han aislado y caracterizado proteasas gástricas a partir de peces, entre ellas la pepsina. Suspropiedades catalíticas únicas y diferenciales respecto a las proteasas gástricas de bovinos y porcinos resultan ser de gran interés y las conviertenen potenciales enzimas de uso a gran escala.Es de gran importancia comprender cómo un factor químico y/o físico particular influye en la actividad y estabilidad enzimática, no sólo porque cadamedición de la velocidad enzimática depende del manejo criterioso de estos factores, sino también porque estos factores son de gran interéspráctico al emplear las propiedades de las enzimas con fines comerciales. Es por ello que el objetivo de este trabajo fue evaluar la influencia del pHsobre la actividad y la estabilidad de un extracto gástrico, con actividad pepsina, obtenido de las vísceras de desecho del surubí.Para ello se extrajo la mucosa de los estómagos de surubí y se la sometió a tratamiento mecánico con buffer 0,1 M glicina-HCl pH 2 para extraer yactivar la pepsina presente en el extracto crudo resultante. Para evaluar la actividad proteolítica se empleó solución de hemoglobina (Hb) ácida comosustrato, según el método de Anson y Mirsky (1932) y la unidad de actividad enzimática se expresó de acuerdo con lo descripto por Zhou y cols.(2007). Se cuantificó la concentración proteica de los extractos utilizando el método de Bradford (1976) con albúmina bovina como estándar. Sedeterminó el efecto del pH sobre la actividad del extracto crudo empleando soluciones de hemoglobina preparadas con diferentes buffers cubriendo unrango de pH de 1 a 9 y llevando los extractos a el pH correspondiente justo antes de realizar la determinación. La estabilidad de la enzima frente al pHse estudió incubando los extractos a distintos pH (1-9) durante 120 min, inmediatamente después de este período se llevaron las muestras a pH 2 paraluego medir su actividad sobre Hb ácida. Todos los experimentos se realizaron por triplicado y los resultados se expresaron como actividad relativaporcentual respecto a las muestras control consideradas como el 100%.Se obtuvo un extracto crudo (EC) cuya concentración proteica y actividad proteolítica media resultaron ser 0,15mg/mL y 31,17Abs280/mL.min,respectivamente. Al comparar el EC de surubí con EC obtenidos de otros peces de agua dulce de la región, se observó que los niveles de actividadenzimática y proteína resultaron superiores para el pez motivo del presente trabajo. El estudio de la influencia del pH en la actividad enzimática delextracto crudo de surubí permitió determinar que el mismo presenta su óptimo de actividad a pH 2, mientras que en el rango de pH 1 a 3 exhibeactividades iguales o superiores al 80% de su actividad proteolítica máxima A pHs mayores a 3 su actividad decae de forma pronunciada,inactivándose completamente a pH 6. El valor de pH óptimo hallado para el EC de surubí concuerda con lo reportado para extractos gástricos conactividad pepsina de otros peces de río pertenecientes a esta región, como el pacú, la palometa y el sábalo. En cuanto a la estabilidad enzimáticadel EC frente al pH, se observó que es estable en un rango amplio de 1 a 7, observándose actividades residuales mayores o iguales al 90% de laactividad proteolítica inicial. En medios levemente alcalinos, pH 8, el extracto gástrico de surubí aún retuvo el 80% de su actividad inicial; mientrasque a pH 9 ésta decayó a un 12%. El comportamiento observado para el EC de surubí es similar al observado para el EC de palometa, siendo másestables a pH neutros y levemente alcalinos que los EC de pacú y sábalo, los cuales se inactivaron o sólo retuvieron el 25% de su actividadproteolítica inicial, respectivamente.Los resultados obtenidos sientan base para optimizar las condiciones de pH en futuras purificaciones de pepsina gástrica de surubí a partir de unextracto crudo. Por otro lado, también resulta de gran interés para establecer los rangos de pH en los que podría ser utilizado el extracto crudo deeste pez en procesos industriales (eg. extracción de colágeno de piel de peces) de forma que la enzima permanezca estable y activa.