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La tripsina es una proteasa ampliamente utilizada en diversas industrias, tales como agroalimentarias, farmacéuticas, de detergentes, curtiembres y en la extracción de plata de placas radiográficas. Su aplicabilidad deriva de la estabilidad y actividad que exhibe en condiciones adversas, como altas temperaturas, pH alcalino y presencia de tensioactivos y agentes oxidantes. Actualmente, las tripsinas utilizadas en procesos industriales son de origen bovino y porcino. Sin embargo las vísceras de peces constituyen una fuente alternativa para su obtención. Países con amplias costas marítimas han iniciado este tipo de estudios en busca de aprovechar el contenido enzimático de este desecho digestivo a partir de diversas especies. En los últimos años ha crecido el interés en reutilizar los residuos del procesamiento de la actividad ictícola convirtiéndolos en productos comercializables, incluso teniendo en cuenta que cerca del 20 al 60% del peso del pescado se transforma en residuo, cuya disposición final genera problemas ambientales. Piaractus mesopotamicus (pacú) es un pez endémico de las cuencas de los ríos Paraguay y Paraná, incorporado al sistema productivo de la región NEA. Estudios anteriores han demostrado la presencia tripsina en los ciegos pilóricos de esta especie y la posibilidad de ser aislada. El objetivo del presente trabajo es caracterizar una tripsina aislada de ciegos pilóricos de pacú del nordeste argentino, con el fin de evaluar su uso potencial como como aditivo en detergentes enzimáticos. Muestras. Se emplearon ciegos pilóricos de vísceras de pacú, suministrados por el Establecimiento Arrocera San Carlos (La Leonesa, Chaco). Preparación del extracto alcalino: El tejido fue disgregado con buffer Tris-HCl 50mM, NaCl 0.5mM, CaCl2 20mM, pH 7.8, sonicado y centrifugado, recogiéndose el sobrenadante para el aislamiento de tripsina. Actividad tripsina. Se determinó sobre el sustrato cromogénico BApNA (Na-benzoil-DL-arginina-P-nitroanilida), siguiendo la reacción por medición de la absorbancia a 410 nm a través del tiempo en una lectora de microplacas termostatizada a 30°C. Aislamiento de tripsina. El extracto alcalino fue sembrado en una columna de afinidad de Benzamidine Sepharose, equilibrada con buffer A. Las proteínas retenidas fueron eluídas con buffers a pH 4.5 y 3.2. Las fracciones obtenidas fueron monitoreadas a 280nm y testeadas con BAPNA. Electroforesis. Se empleó SDS-PAGE y tinción con plata para el análisis de pureza. Caracterización. Se estudió el efecto de diferentes agentes sobre la actividad enzimática de la tripsina pre-incubándolos en relación (1:1) durante 30 minutos. En todos los casos se determinó la actividad BApNA residual. ? Inhibidores: Se empleó PMSF (phenylmethylsulfonyl fluoride, inhibidor de serinoproteasas, concentración final 1mM), EDTA (ácido etilendiaminotetraacético, inhibidor de metaloproteasas, conc. final 2mM) y SBTI (trypsin inhibitor from soybean, inhibidor específico de tripsina, concentración final 1mg/mL). - Efecto de iones metálicos Ca2+ y Mg2+ (concentración final 10 mM) y agentes surfactantes Tween 20, Tween 80 y Tritón X-100 (conc. final 1%). La enzima obtenida de los ciegos pilóricos de pacú se sometió a estudios bioquímicos con el propósito de caracterizarla. A través del uso de inhibidores de proteasas específicos se confirmó la identidad de la enzima obtenida, tratándose de tripsina al ser inhibida 100% por SBTI, 69% por PMSF, y 85% por EDTA. La compatibilidad de la tripsina con agentes surfactantes resulta de gran interés ya que la adición de proteasas a los detergentes aumenta considerablemente el efecto de limpieza eliminando las manchas de naturaleza proteica. En este caso, la tripsina aislada resultó estable ante la presencia de surfactantes no iónicos (Tritón X-100, Tween 20 y Tween 80), exhibiendo una actividad residual cercana al 100%. Por otro lado, la actividad de la enzima aislada se vio afectada en muy baja proporción frente a los iones bivalentes Ca2+ y Mg2+ en una concentración hasta 10 mM (actividad BApNA residual 95% y 94%, respectivamente). Si se tiene en cuenta el uso potencial de la tripsina de pacú como aditivo en formulaciones de jabones lavar, su comportamiento frente a estos iones resulta de valor para este uso ya que el empleo en aguas duras no habría de afectar su actividad. En conclusión, se obtuvo una enzima con actividad tripsina a partir de un extracto de ciegos pilóricos de pacú, resistente a agentes como iones metálicos bivalentes (como aquellos presentes en aguas duras) y surfactantes no iónicos. Estos resultados aportan información de valor, a ser tenida en cuenta en futuros desarrollos, como potencial componente en formulaciones de jabones enzimáticos.