IQUIBA-NEA   25617
INSTITUTO DE QUIMICA BASICA Y APLICADA DEL NORDESTE ARGENTINO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Fitoquímica y actividades biológicas (antioxidante y anti-inflamatoria) de Nectandra angustifolia ?laurel amarillo?
Autor/es:
RICCIARDI, GABRIELA ; FERRINI, LEANDRO -; RODRÍGUEZ, JUAN PABLO ; TORRES, ANA ; AGUIRRE, VICTORIA.
Lugar:
Resistencia (chaco)
Reunión:
Jornada; XXV Reunion de Comunicaciones Cientificas y Tecnologicas 2019; 2019
Institución organizadora:
SECYT UNNE
Resumen:
En la etnomedicina son utilizados los extractos de hojas y corteza del laurel amarillo por sus propiedades digestivas (Martinez Crovetto, 1981), pa-ra el tratamiento de reumatismo, artritis, dolor (Bertucci et al, 2008) y como antiveneno contra picaduras de víboras (Gonzalez Torres, 1992). Estudios realizados por Truiti (2004 y 2006) muestran que el extracto crudo de hojas de N. angustifolia reduce la permeabilidad capilar inducida por agentes flogísticos y que el extracto etanólico por vía oral (sonda nasogástri-ca) reduce el volumen del exudado en ratas inducido por inyección intrapleu-ral. Oliveira de Melo et al (2006) comprobaron que en dosis de 500 mg/kg el extracto causa una reducción estadísticamente significativa en la intensidad de respuesta a las 2 y 4 horas posteriores a la inyección de carragenina como inductor de edema en pata de ratas y también el volumen de exudado infla-matorio pleural inducido. Es sabido que las especies vegetales pueden variar su composición química (metabolismo secundario) debido a influencias edafoclimatológicas. Desde este punto de vista, no se dispone de información científica sobre la especie autóctona, su actividad biológica como antioxidante y/o antinflamato-rio, por lo cual es nuestro objetivo analizar dos tipos de extractos diferentes para evaluar actividad y validar de esta manera su uso etnofarmacológico para nuestra región.-MATERIALES Y MÉTODOS:Material vegetal: Se colectaron partes aéreas (hojas y tallos tiernos) de Nec-tandra angustifolia (Schrad.) Nees & Mart. ex Nees (Na) en camino lateral a San Isidro (Corrientes) a 9 km de la ruta 12, cerca del río Empedrado. Depo-sito en herbario CTES N° S. Tressens 7094.Extractos: El material fue secado por oreo en el laboratorio y molido (tamiz 20), obteniéndose los extractos por maceración en etanol 96° (ETOH) y me-tanol (MEOH) respectivamente durante 48h con agitación continua. Los ex-tractos se filtraron y desecaron con rotavapor Büchi a presión reducida. Determinación del contenido en Flavonoides: se realizó con la técnica del tri-cloruro de aluminio y medida de la absorbancia a 434 nm. Curva de calibra-ción con quercetina (12,5 a 100 µg/mL) (Martínez Vásques, 2007).Actividad antioxidante por DPPH: (2-difenil-1-picrilhidracilo) (Prior, 2005)Ensayo Cualitativo: Se sembró en una placa de cromatografía cada extracto a evaluar disuelto en su solvente madre (1mg/mL) y se asperjó con la solución de DPPH (0,3 mg/mL).Determinación cuantitativa: Se realizaron lecturas de absorbancia del DPPH (0,3mg/mL) a 517 nm (A0), absorbancia del patrón de ácido gálico (0,2 mg/mL en etanol) con el agregado de DPPH durante los primeros 5 a 15 mi-nutos; absorbancia de la solución del extracto (1 mg/mL) (Abo) y por último la absorbancia de la solución de extracto con el agregado de 1 mL de DPPH lecturas desde el tiempo 0 y hasta 30 minutos (Amct: absorbancia de la muestra a la concentración c y al tiempo t)El cálculo del % de actividad antioxidante (%AA) se realizó mediante la si-guiente fórmula: % AA= 100 ? [100*(Amct ? Ab0) / A0)]Cultivos en monocapa de células RAW 264.7: Macrófagos murinos de la línea Raw 264.7 fueron cultivados en medio Roswell Park Memorial Institute 1640 (RPMI) suplementado con 10 % de Suero fetal bovino y Penicili-na/estreptomicina. Al momento de trabajo, la monocapa se despega y se ajusta la cantidad requerida por recuento con colorante supravital Trypan-blue. Las líneas celulares congeladas se mantuvieron en nitrógeno líquido a -180ºC.Determinación de viabilidad en células RAW 264.7: Se preparó una placa de 24 pocillos con 1,4.105 células, luego de 24H de cultivo se expone a concen-traciones crecientes de Na ETOH, cada concentración se prueba por cuadripli-cado. Luego de 24 H de exposición se contaron las células en cámara de Neu-bauer por tinción con colorante supravital Trypan-blue.Evaluación del perfil de expresión de citoquinas (RT-PCR) en células Raw 264.7: Se prepararon placas de 35 cm2 con 1,5.105 células por placa cultiva-das con medio completo durante 48 H. Se estimulan de acuerdo con el grupo perteneciente (Control, Na+LPS, LPS). Luego de 4 horas o 24 horas, según el ensayo, se adiciona Trizol (Invitrogen®) para la extracción de mRNA, si-guiendo las instrucciones del fabricante. La calidad del mRNA se evaluó acor-de al criterio de relación entre absorbancias 260/280: 1,8-2. El cDNA se sinte-tizó usando retrotranscriptasa M-MLV siguiendo las instrucciones de la casa comercial (Ambion). Se analizó por qPCR la expresión de IL-1 por cuantifica-ción relativa versus la expresión de GAPDH, en el proceso de amplificación de los cDNA se trabajó con 40 ciclos; cada ciclo se ajustó al siguiente régimen establecido por el comerciante del kit (Solis BioDyne): desnaturalización a 95°C por 15 segundos (seg), hibridación a 60°C por 20 seg y elongación a 72°C por 20 seg. REsULTADOS Y DISCUSIÓN:Obtención de extractos y caracterización de su capacidad antioxidanteSe obtuvo un rendimiento expresado como extracto seco del 9,2% en NaE-TOH y del 17% en NaMEOH. El contenido en flavonoides expresado en equi-valentes de quercetina fue mayor en el extracto etanólico NaETOH: 279,027 µg/mL quercetina (sigma=10,2) que en NaMeOH: 190,845 µg/mL quercetina con sigma= 2,5).Respecto a la actividad antioxidante del extracto etanólico y metanólico, en el ensayo cualitativo ambos presentan una notable actividad decolorando el reactivo DPPH.Con estos resultados preliminares se concluye que el extracto etanólico de Nectandra angustifolia es capaz de reducir la expresión de IL-1 por el estímu-lo con LPS en células RAW 264.7 a las 4 y 24 horas del mismo. Resta en futu-ros estudios determinar las expresiones relativas de otros mediadores de la inflamación, cómo son IL-6 y TNF-a.