IQUIBA-NEA   25617
INSTITUTO DE QUIMICA BASICA Y APLICADA DEL NORDESTE ARGENTINO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Fraccionamiento bioguiado de un extracto de Eclipta prostrata activo contra veneno de yarará chica
Autor/es:
ANA MELISSA GONZALEZ MIRAGLIOTTA; ANA MARIA TORRES
Lugar:
Corrientes
Reunión:
Jornada; XXIV Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas; 2018
Institución organizadora:
UNNE
Resumen:
Existen referencias en relación al uso de esta especie conocida vulgarmente como eclipta, hesillo, tangará-ka?á (Gonzalez Torres D., 1997; Domínguez J., 1928) contra picaduras de víboras en Paraguay (Marzocca A., 1997). También los indígenas de la Amazonia la utilizan, tomando la infusión como preservativo contra posibles picaduras de serpientes venenosas (Mors W. et al., 1989). Muchas de estas propiedades han sido confirmadas (Pithayanukulo P. et al., 2004; Mors W. et al., 1989; Melo P. et al., 1994; Martz W., 1992; Houghton P. y Osibogun S., 1993; Melo P. y Ownby C., 1999) respecto a E. prostrata y a serpientes del género Bothrops de otros países. Con respecto a la especie autóctona, hemos encontrado en trabajos previos, que extractos de raíz etanólicos inhiben la actividad coagulante y la actividad proteolítica del veneno de Bothrops diporus en dos localidades de recolección diferentes (González Miragliotta et al., 2017) confirmando su uso etnofarmacológico en la región.El objetivo del presente trabajo es fraccionar el extracto etanólico de raíces de E. prostrata mediante cromatografía flash, a fin de aislar los metabolitos responsables de la actividad alexitérica hallada.Se colectó material vegetal (raíces) en Laguna Brava (Corrientes) en verano, de manera de preparar por maceración en etanol 96° durante 48 horas el extracto alcohólico. Posteriormente se desecó en rotavapor al vacío y se preparó la muestra a fraccionar pesando 200 mg del extracto, se disolvió en etanol y agregó silica gel G, rotaevaporando hasta sequedad. Se dispuso una columna de 24 x 400 mm con robinete y tapón esmerilado para mantener la presión, conectada a una bomba de aire de pecera CX-1000 para realizar la cromatografía flash (silica gel flash 60 0,04 - 0,063 mm, MN). La columna se eluyó utilizando 50 ml de los siguientes solventes en orden de polaridad creciente: hexano, hexano- acetato de etilo (3+2); hexano- acetato de etilo (2+3); acetato de etilo; acetato de etilo- metanol (3+2); acetato de etilo-metanol (2+3), acetato de etilo- metanol (1+4) y metanol. En paralelo se realizó TLC en cromatofolios de sílica gel GF de cada uno de los tubos separados, utilizando Acetato de etilo-Hexano (9+1) como eluyente, radiación UV a 254 y 365 nm y reactivo anisaldehido sulfúrico para revelar. Los tubos con igual perfil cromatográfico se reunieron y cada fracción se evaporó a presión reducida, obteniéndose de esta manera cuatro fracciones F1, F2, F3 y F4 (en orden de polaridad).Se realizó el seguimiento bioguiado mediante la inhibición de la actividad coagulante del veneno de Bothrops diporus en coagulómetro COL1 mediante la técnica de recalcificación del plasma citratado (Iovine y Selva, 1985).El extracto entero de la raíz (R2) y sus fracciones 1, 2, 3 y 4 fueron preincubadas con la dosis coagulante mínima del veneno de B. diporus durante 30 minutos a 37°C para determinar la inhibición de la propiedad coagulante de cada una de ellas. Los porcentajes de inhibición resultaron para las fracciones: 39%, 81%, 100% y 84% respectivamente, mientras que el extracto R2 inhibió el 55%. Mediante ensayos fitoquímicos se determinó la presencia de alcaloides (Dragendorff) y fenoles (tricloruro férrico) en la fracción más activa F3. De esta manera, mediante cromatografía en columna, hemos logrado purificar una fracción enriquecida en metabolitos secundarios activos contra veneno de yarará responsables del efecto alexitérico de la especie autóctona lo cual nos permitirá continuar la investigación.