Caracterización de la fracción fosfodiesterasa del veneno de Crotalus durissus terrificus

FUSCO, LUCIANO; HYSLOP, STEPHEN; TORRES HUCO, FRANK; LEIVA, LAURA; RAPP, IGOR

RESISTENCIA

Encuentro; XXIII Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2017; 2017

Universidad Nacional del Nordeste

Las fosfodiesterasas (PDEs) pertenecen a una super-familia de enzimas que tienen múltiples funciones en el metabolismo de nucleótidos. Losvenenos de serpientes contienen PDE (e.j. Trimeresurus stejnegeri, Daboia russelli russelli, Bothrops jararaca) pero su función, hasta el presente, noes totalmente comprendida. En este trabajo, se aisló una fracción PDE del veneno de Crotalus durissus terrificus (CDT-PDE) a través de dos etapascromatográficas. La primera consistió en una columna de exclusión molecular (Superdex G-75) donde los componentes del veneno se resolvieron enseis picos cromatográficos, de los cuales el primero presentó actividad PDE. Estas fracciones fueron mezcladas en un pool, concentradas y luegoaplicadas a una columna de intercambio aniónico(Q-FF). Las fracciones que eluyeron en primer término exhibieron actividad PDE, las que fueroncolectadas para su análisis. La homogeneidad de las bandas visualizadas por electroforesis en geles de poliacrilamida en SDS-PAGE fue verificadapor espectrometría de masa. Se identificaron dos isoformas con una masa de 96,32 y 91,69 kDa, y con un punto isoeléctrico de 7,84 y 8,7respectivamente. Se estudió la influencia de la temperatura en un rango de 4-80°C y del pH (4-10) sobre la actividad enzimática de la fracción PDE,empleando bis-p-nitrofenilfosfato como sustrato y adicionalmente su actividad sobre diferentes sustratos como Adenosin mono, di y trifosfato (AMP,ADP y ATP). Los resultados demuestran la factibilidad de aislamiento de esta fracción fosfodiesteresa con pureza apropiada, la cual contiene dosisoformas. Los estudios de caracterización enzimática de esta fracción de PDEs mostró que la actividad es optima a 50-60°C por encima de la cualpierde totalmente actividad. La fracción mostró máxima actividad a pH 6 y a pH 8, probablemente debido a la presencia de dos isoformas.Los resultados demuestran que esta fracción PDEs puede actuar sobre diferentes sustratos como AMP > ADP > ATP, así la fracción tendría tambiénactividad 5?nucleotidasa, comportamiento similar a la enzima aislada del veneno de Agkistrodon acutus.De este estudio, es de interés destacar, que el efecto enzimático de las PDEs es capaz de liberar adenosina. Son diversos los efectos asociados aeste nucleosido (vasodilatación, edema, cardiovascular, etc) y futuros estudios bioquímicos y moleculares podrán dilucidar el rol de estas proteínas enla intoxicación crotálica como así también su potencial aplicación farmacológica.