IQUIBA-NEA   25617
INSTITUTO DE QUIMICA BASICA Y APLICADA DEL NORDESTE ARGENTINO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
ESTABILIDAD QUÍMICA Y ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE UN EXTRACTO GÁSTRICO DE PACÚ RICO EN PEPSINA.
Autor/es:
BUSTILLO, SOLEDAD; LEIVA, LAURA; BOGADO, CAROLINA
Lugar:
Corrientes
Reunión:
Jornada; XXII Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2016; 2016
Institución organizadora:
UNNE
Resumen:
La producción de pacú (Piaractus mesopotamicus) representa el 40% del cultivo ictícola de la zona. Sin embargo, el crecimiento de esta actividad eslento comparado con otros países latinoamericanos, hecho debido especialmente a la alta competencia con las actividades agropecuariastradicionales y a la ausencia de hábito en el consumo de pescado entre otros factores. Es de interés propiciar la cría del pacú en la región mediantela incorporación de un valor agregado a su producción, a través del aprovechamiento de un desecho como son sus vísceras las que, descartadas almedio pueden inducir problemas ambientales. Las enzimas digestivas, tales como la pepsina obtenida a partir de vísceras de ganado bovino yporcino, tienen gran aplicabilidad en la industria y un gran valor de comercialización. La producción de estas enzimas de origen ictícola es de recientedesarrollo a nivel mundial, no habiendo estudios de este tipo en nuestra región.El objetivo de este plan fue obtener un extracto rico en la enzima digestiva pepsina partir del estómago del pacú e iniciar su caracterización bioquímica,a fin de reunir información que permita en una instancia posterior diagramar su óptima purificación.Los ejemplares estudiados, fueron obtenidos de la empresa Estancia La Elina (en Riachuelo, Corrientes). Fueron sacrificados y se extrajo de ellos susistema digestivo, del cual fue aislado posteriormente su estómago. La obtención del extracto se realizó extrayendo la mucosa del estómago, que se lavó yhomogeneizó en baño de hielo con agua destilada. Luego, se realizó una digestión mecánica, se agregó buffer Tris pH 2 y a esta mezcla se la llevó a unsonicador por 15 min. Una vez pasado este tiempo, se centrifugó 10 min, recogiéndose el sobrenadante y conservándolo a -20°C hasta la ejecución delos ensayos.Para el ensayo de la actividad enzimática, se utilizó el método de Anson y Mirsky (1932) usando como sustrato una solución ácida de hemoglobina.Así, 0,1mL de extracto enzimático se añadió a 0,2mL de hemoglobina al 2.5% P/V en HCl, a pH 2.0. La reacción se mantuvo 30 minutos a 37ºC, y se ladetuvo con 0,4mL de ácido tricloroacético (TCA) al 5%. Luego de 30 min a temperatura ambiente se centrifugó por 15 min. Al sobrenadante se le midióla Abs a 280 nm. Los trabajos se hicieron por triplicado, utilizando un blanco de muestra, al cual se le agregó el TCA 5% en la mezcla inicial.Los estudios de este trabajo se centraron en analizar la estabilidad de la enzima, para la cual se ensayó su actividad bajo diferentes variables. Paraestudiar el efecto del tiempo, porciones de 800 uL del extracto obtenido se mantuvieron a temperatura ambiente por diferentes tiempos y luego seensayó su actividad según técnica descripta anteriormente. Para el efecto de la temperatura, porciones de 800 uL del extracto obtenido se incubarona diferentes temperaturas por 2 h, y luego se ensayó su actividad. Finalmente, para el efecto del pH, porciones de 800 uL del extracto obtenido seincubaron a diferentes pH por 2 h y a temperatura ambiente y luego se ensayó su actividad.Pudimos observar que, el efecto del tiempo en la estabilidad del extracto obtenido a temperatura ambiente, se evidencia como una escasa disminuciónen su actividad luego de 12 h. En cuanto a la estabilidad en función de la temperatura, su actividad se vió afectada por encima de los 37°C, la cualdisminuye en forma proporcional hasta perder su actividad cerca de los 60°C. El efecto del pH, se evidenció a partir de valores de pH 5 en el quedisminuyó en un 85%, anulándose a pH superiores como 7 y 8.Los resultados aquí obtenidos permiten constatar que la actividad enzimática de un extracto rico en pepsina obtenido a partir del estómago del pacú,disminuye significativamente luego de 12h a temperatura ambiente o de 2h a temperaturas superiores a 37ºC. Además, desnaturalizan a estaenzima valores de pH iguales o superiores a 5.Esta información será primordial para la ulterior implementación de procesos de purificación que conlleven a la obtención de una enzima de alta calidadpreservando su estabilidad química y actividad biológica.