CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

Las semillas de chía (Salvia Hispánica) y lino (Linum usitatissimum L.) son ingredientes alimentariosnaturales ricos en ácidos grasos Omega-3 principalmente bajo la forma de ácido alfa-linolénico (ALA,ω3), sus potenciales efectos antiinflamatorios resultan un área de interés, el uso de las mismas bajo laforma de harinas integrales constituye un abordaje innovador. El ratón de laboratorio es unaherramienta de estudio preeminente en la investigación experimental, una nutrición óptima y funcionalfavorece respuestas más eficientes ante los tratamientos aplicados con la consecuente obtención deresultados más objetivos basados en el efecto molecular favorecedor de los principios bioactivos de losingredientes funcionales empleados para formular las dietas 1. Este trabajo tuvo como objetivodesarrollar dietas híbridas para ratones de experimentación a partir de harina integral de chia y linoricas en ácidos grasos omega-3 (ω-3) y de otros ingredientes naturales y comerciales en vista delpotencial efecto antiinflamatorio de las harinas estudiado in vivo e in vitro en un modelo murino deinflamación sistémica inducido por LPS. Se formularon dos dietas híbridas según los requerimientosnutricionales acorde a la normativa internacional1, su desarrollo se realizó a escala laboratorio bajo laforma de extrusados. Se analizó la composición centesimal, perfil lipídico y seguridad microbiológicade cada una de las dietas obtenidas. Seguidamente, se distribuyeron aleatoriamente en tres gruposexperimentales 30 ratones machos, de 28 días de edad, isogénicos de la cepa Balb/c (n = 10/grupo) yse alimentaron con el siguiente esquema: grupo 1: dieta A (control comercial), grupo 2: dieta B (harinaintegral de chia) y grupo 3: dieta C (harina integral de lino). El agua y los alimentos fueron provistos adlibitum durante 70 dias (10 semanas). Los protocolos contaron con el aval del CICUAL Fac. Med UNNE(Resolución 0002-CICUAL/17). Se monitoreó semanalmente el peso de los animales, comportamiento,aspecto de pelaje y mucosas asi como la cantidad de alimento consumido. Concluído el plazo se indujoestado inflamatorio sistémico mediante inyección intraperitoneal (i.p) de LPS (lipopolisacárido de deEscherichia coli 0127: B8, Sigma) en dosis 1.5 mg/kg 6 horas antes del sacrificio2 de la siguientemanera: en n=5 de cada grupo se indujo inflamación (inyección de LPS) y en n=5 de cada grupo no seindujo. Transcurridas 6 horas de la inducción, se anestesiaron a los animales con pentobarbital 10% yse realizó la eutanasia por dislocación cervical. Tras el sacrificio se esterilizó la zona abdominal conetanol 70%, realizando una incisión ventral para exponer el peritoneo. La cavidad se lavó con 3-5 mlde RPMI suplementado con 0.1 % gentamicina y se colectó en tubo Falcon de 15 ml en hielo. Laproporción de macrófagos (MO) en la población celular peritoneal se determinó por tinción con α-naftiloque evaluó la presencia de la esterasa inespecífica para comprobación de recuperación de más del90% de MO. Para diferenciar los monocitos a macrófagos, a la suspensión celular se adicionó 100ng/ml de LPS gamma irradiado (Sigma) con incubación de 48hs hasta la completa diferenciación. Sedeterminó la expresión del factor de transcripción NF-kB en células procedentes de lavados i.p. trasestimulación con LPS (Anti-NF-κB p65 antibody ? Santa Cruz Biotechnology). La inmunorevelación serealizó usando el kit DAKO LSAB + /HRP kit (DakoCytomation) seguido del Kit DAB/H2O2(DakoCytomation) utilizado como cromógeno. La inmunofijación se valoró usando un microscopioóptico (Olympus BX40, Tokio, Japan). Por último, se realizó el ensayo de capacidad fagocítica de MOperitoneales mediante incubación con partículas de carbón coloidal a partir de MO peritoneales trasestimulación in vitro con LPS. Los resultados se analizaron utilizando el software INSTAT 6.0 y PRISMversión 6.0 (GraphPad Software, USA). Los resultados se expresan como la media ± SD.La composición centesimal de las dietas, su perfil lipídico y seguridad microbiológica se determinaronmediante análisis multiparamétricos encontrándose en rangos de normalidad. Las dietasexperimentales B y C exhibieron una adecuación nutricional óptima evidenciada en un estadonutricional óptimo con pesos correspondientes a los valores de referencia para la cepa, sexo y edad1,aspecto normal de pelaje, mucosas y de comportamiento. La fagocitosis de macrófagos murinosestimulados con LPS in vitro disminuyó significativamente en animales que recibieron las dietas B y C,esto se encuentra en consonancia con lo hallado por Saray Gutierrez et al 3.Paralelamente, la expresión nuclear del factor NF- kB (p65) en macrófagos peritoneales disminuyó enmuestras de animales que recibieron las dietas B y C con respecto al control (Figura 1), esto seencuentra acorde a los hallazgos de Araujo de Miranda et al 4. En conclusión, este estudio describe eldesarrollo, evaluación de la adecuación nutritiva de dos dietas experimentales híbridas para murinos basadas en harina integral de chia y lino. Las formulaciones demostraron de manera preliminar tenerefectos antiinflamatorios cuyas bases quedan sentadas para continuar su estudio.