Exposición in vitro de células trofoblásticas JEG-3 al inseticida organofosforado clorpirifos, efectos sobre la indcción y actividad de enzimas metabólicas de fase I

PECHEN ANA M; DIEGO SEBASTIÁN GOMEZ; SÁNCHEZ, VICTORIA GUADALUPE; GUIÑAZÚ, NATALIA

Córdoba

Jornada; XXXIV Jornadas Argentinas Interdisciplinarias de Toxicología; 2016

Asociación Toxicológica Argentina

La placenta y el trofoblasto expresan gran variedad de enzimas metabólicas de fase I, como las familias citocromo P450 (CYP) y carboxilesterasa (CES). Estas enzimas son importantes para los procesos de detoxificación y/o bioactivación de xenobióticos, pudiendo modificar la toxicidad de los compuestos. Los xenobióticos además de ser biotransformados por estas enzimas serían capaces de modificar su expresión y actividad. El objetivo del presente trabajo fue estudiar si la exposición de células trofoblásticas JEG-3 a uno de los principios activos más utilizado en el país modula los niveles de transcripto y actividad de enzimas CYP y CES. Se expusieron células JEG-3 al plaguicida organofosforado clorpirifos (Cp) a las concentraciones 0,1; 1; 10 y 100 µM durante distintos tiempos de incubación. Se estudió la transcripción de CYP1A1, 1A2, 2B6, 2C19, 3A4, CES1 y CES2 por Reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR) a 8 y 24 h de exposición. Los resultados fueron corroborados por reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR). La actividad enzimática CYP se determinó usando 7-etoxycoumarina (ECOD) a 24 y 48 h. por fluorescencia. La actividad de CES se determinó espectrofotométricamente luego de 4, 12 y 24 h.Los resultados demostraron que Cp induce la expresión de transcripto de CYPs 2C19, 2B6 y 3A4 1,5 veces respecto del control luego de 8 h. de exposición sólo a 100 µM. En el caso de CES, no se observaron cambios en los niveles de expresión de mRNA. La actividad ECOD no registró cambios significativos, sin embargo a las 48 h. se ve una tendencia a la inhibición a altas concentraciones. CES muestra una clara inhibición a todas las concentraciones ensayadas a 24 h. de exposición.Estos resultados demuestran que JEG-3 expresa una maquinaria enzimática capaz de bioactivar a Cp a la forma oxón, inhibidora de B-esterasas y CES. Asimismo Cp sería capaz de regular la expresión de enzimas metabólicas CYP en este modelo. Estos resultados adquieren especial relevancia en escenarios de coexposición a xenobióticos y/o medicamentos durante el embarazo.