IDENTIFICACIÓN DE MARCADORES MOLECULARES POLIMORFICOS EN POBLACIONES SEGREGANTES PARA EL GEN Rdm3 DE RESISTENCIA AL CANCRO DEL TALLO EN SOJA.

MALDONADO, RODRIGO; MORANDI, ELIGIO N.; BIANCHI, JULIETA S.; CHIESA, MARÍA AMALIA; CAMBURSANO, MARIANA VIRGINIA

Rosario

Congreso; XXII Congreso y XL Reunión anual de la SBR; 2020

Sociedad de Biología de Rosario (SBR)

El estrés biótico causado por distintos organismos patogénicos es uno de los principales factores limitantes de la producción del cultivo de la soja [Glycine max (L.) Merr.] a nivel mundial. Particularmente, Diaporthe aspalathi (E. Jansen, Castl. & Crous) (syn. Diaporthe phaseolorum var. meridionalis, Dpm), variedad fúngica presente en la región productora núcleo de nuestro país, es uno de los agentes causales de la Cancrosis del Tallo de la Soja (CTS), enfermedad muy destructiva y de riesgo fitosanitario potencial para la Argentina y otros países productores de soja. Hasta el momento, la resistencia a CTS causada por Dpm está conferida por cinco genes Rdm mayores, dominantes y de herencia simple, de los cuales identificamos molecularmente a Rdm4 y Rdm5. El objetivo de este trabajo fue identificar marcadores moleculares (MM) polimórficos entre el cv. Crockett (Rdm3/Rdm3 resistente, R) y el cv. RA702 (rdm3/rdm3 susceptible, S) progenitores de una población segregante para dicho gen, que será posteriormente utilizada para el mapeo de Rdm3. Para esto, se realizaron extracciones de ADN genómico de los cvs. R y S, utilizando el método miniCTAB con modificaciones. Se analizó la calidad e integridad a partir de geles de agarosa 0,8% P/V y por medidas espectrofotométricas a 260/280 nm. Se analizaron MM de tipo microsatélite (SSR, del inglés Simple Secuence Repeats), que actualmente constituyen una de las clases más polimórficas de MM. Los loci de los SSR disponibles fueron seleccionados a partir del mapa de ligamiento genético, repartidos en los 20 grupos de ligamiento molecular (GLM) (Soybase http://www.soybase.org/sbt/). En la selección se intentó lograr una distribución homogénea para la búsqueda sistemática de los posibles MM-SSR ligados a la resistencia de interés, con un promedio de aproximadamente 20 SSR por cada GLM. En cada GLM los MM-SSR se seleccionaron por su ubicación, a una distancia promedio entre sí de 5 centiMorgan (cM). Las reacciones de amplificación de los SSR y las correspondientes electroforesis en geles de poliacrilamida teñidos con nitrato de plata para el análisis de los fragmentos amplificados, se llevaron a cabo según métodos previamente puestos a punto en el laboratorio. Hasta el momento se analizaron 209 MM-SSR pertenecientes a todos los GLM, resultando 99 polimórficos entre los genotipos parentales, lo que representa un 47,4% de polimorfismo. Posteriormente, se analizarán dichos MM-SSR polimórficos utilizando la técnica de Análisis de Segregantes en Grupo (BSA, del inglés Bulked segregant analysis). Para ello de constituirán dos pooles de ADN equimolar (PR y PS) con el ADN de individuos F2 de la población de mapeo, previamente analizados feno-genotípicamente para la resistencia a Dpm en el test de progenies y caracterizados como R o S. Se analizará el polimorfismo de los MM-SSR previamente obtenidos entre los PR y PS. Se espera encontrar algún/os MM-SSR polimórficos entre PR y PS que indiquen una región genómica con alta probabilidad de estar ligada al gen Rdm3. Esta región se saturará con una mayor cantidad de SSR para lograr el mapeo más aproximado del gen Rdm3 de resistencia a CTS e identificar MM altamente ligados al mismo.