IICAR   25568
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES EN CIENCIAS AGRARIAS DE ROSARIO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Enzimas ligninolíticas en secretomas fúngicos como herramientas potenciales para la producción de bioetanol
Autor/es:
GAUNA ALBERTINA; PERMINGEAT HUGO; FELDMAN SUSANA; LARRAN ALVARO; PEROTTI VALERIA
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; XX Congreso y XXXVIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2018
Institución organizadora:
Sociedad de Biología de Rosario
Resumen:
Los hongos de la podredumbre blanca de la madera son organismos conocidos por poseer un sistema enzimático complejo que les permite degradar los materiales lignocelulósicos. En el presente trabajo, se estudió el secretoma de dos especies fúngicas (Pycnoporus sanguineus y Ganoderma applanatum) cultivadas en un medio líquido basal, alternando la fuente de carbono entre un sustrato lignocelulósico (Panicum prionitis) y salvado de trigo. Los hongos fueron crecidos durante 14 días en agitación a 28 °C. El sobrenadante obtenido se centrifugó, filtró y concentró en tubos concentradores (poro de 10 kDa). Se analizó la actividad celulasa, xilanasa, lacasa y manganeso peroxidasa (MnP) en placas con 1,8% de agar, variando el sustrato específico de la reacción: 0,5% de carboximetilcelulosa y xilano (para actividad celulasa y xilanasa), 1mM de guayacol (para actividad lacasa), 20 mM de dimetoxifenol, 5 mM de sulfato de manganeso y 10 mM de peróxido de hidrógeno (para actividad MnP). Se sembraron 50 μg de proteínas totales en cada pocillo y se incubaron las placas a 30 °C durante toda la noche, visualizando halos de color oscuro para actividad lacasa y MnP, y tiñendo con Rojo Congo en el caso de actividad celulasa y xilanasa. La actividad β-glucosidasa fue evaluada en geles no desnaturalizantes (zimogramas), con el objetivo de analizar la existencia de alguna isoforma tolerante a glucosa. La actividad fue revelada en buffer acetato de sodio (0,2 M) conteniendo 0,1% de esculina y 0,03% de cloruro férrico a 50 °C. Para el estudio de la existencia de una isoforma glucosa tolerante, el gel fue sometido a las mismas condiciones en presencia de concentraciones crecientes de glucosa. Los resultados muestran que el secretoma de P. sanguineus obtenido en ambos medios de cultivos posee actividad de todas las enzimas estudiadas, presentando mayores actividades específicas respecto de G. applanatum. Para dicho secretoma, sólo se observó actividad celulasa y xilanasa en ambos medios. Los zimogramas revelan la presencia de dos isoformas de la enzima β-glucosidasa en el secretoma de P. sanguineus obtenido en el medio con salvado de trigo, presentando la de menor peso molecular una notable tolerancia a concentraciones elevadas de glucosa. Este hallazgo, junto con la caracterización proteómica del secretoma de P. sanguineus previamente realizada, permiten el diseño de diversas estrategias orientadas a la obtención de proteínas recombinantes de gran impacto en la industria de los biocombustibles, vitivinícola y papelera, entre otras.