Obtención de individuos genéticamente idénticos por clonado de Sorghum halepense y Amaranthus palmeri para la identificación de alelos de resistencia a herbicidas del grupo A y B, respectivamente.

PALMIERI VE; PERMINGEAT HR; MARTINATTO AK; PEROTTI VE; MONASTEROLO L

Bahía Blanca

Simposio; Simposio RedBio 2017; 2017

RedBio

Laaparición de poblaciones de malezas con resistencia a diferentes herbicidastrajo como consecuencia la reducción en la utilidad práctica y económica deestas herramientas químicas, e importantes pérdidas en la producción.Actualmente, la base de datos de malezas resistentes a herbicidas;www.weedscience.com informa que existen 159 especies resistentes a herbicidasdel grupo B (inhibidores de ALS) y 48 especies resistentes a herbicidas delgrupo A (inhibidores ACCasa), siendo el yuyo colorado (Amaranthus palmeri) y el sorgo de Alepo (Sorghum halepense) respectivamente, dos de los casos de resistenciamás relevantes en nuestro país.Amaranthus palmeri es una planta dioica, muy agresiva que se caracteriza por tener altatasa de crecimiento, elevada tolerancia a los ambientes adversos, granvariabilidad genética y una prolífica producción de semillas que promedia las600.000 por planta femenina. Por su parte, Sorghumhalepense es una gramínea C4 perenne de gran tamaño, robusta y agresiva,difícil de controlar debido a su biología reproductiva por rizomas y pordispersión de semillas de gran longevidad. Ambas malezas afectan principalmentea cultivos estivales, tales como maíz y soja.Por todolo expuesto, la generación de herramientas para el estudio de los mecanismos deresistencia involucrados en cada caso resulta de gran importancia para afrontaresta problemática agronómica actual. Con este objetivo, y dada la altavariabilidad alélica hallada en las poblaciones resistentes en experimentos a priori, se diseñaron estrategias paraobtener plantas genéticamente iguales de cada maleza sobreviviente a laaplicación del herbicida correspondiente, a la dosis de campo, para luegocaracterizar individualmente el gen blanco del herbicida (als ó accasa).Seoptimizó un método de clonado artificial para yuyo colorado, utilizandoesquejes, solución de enraizamiento y luz continua por 7 días, para luegocontinuar el cultivo de los clones en condiciones normales de crecimiento. Losproductos de las amplificaciones específicas del gen blanco als mediante PCR a partir de ADNgenómico de 6 clones de A. palmeri fueronenviados a secuenciar, obteniéndose múltiples alelos diferentes a la versiónsensible, portadores de 3 mutaciones previamente reportadas (A205V, W574L,S653N) y/o 13 nuevas sustituciones, 3 de las cuales revisten mayor importanciapor estar comprendidas dentro de los dominios conservados asociados al fenotipode resistencia o en regiones contiguas a los mismos.Parael caso de sorgo de Alepo, la propagación por rizomas facilitó la obtención delos clones bajo estudio. Siete de los mismos fueron sometidos a ensayos de PCRalelo específica para evaluar la presencia de la mutación I2041N, previamenteencontrada en esta población. Resultados preliminares muestran que no fueposible hallarla entre los individuos testeados, abriendo la posibilidad de laexistencia de un nuevo mecanismo de resistencia a inhibidores del grupo A en lapoblación bajo estudio. La secuenciación completa del gen blanco accasa en cada uno de estos clonesresistentes resulta ineludible para evaluar esta hipótesis.Deeste modo, el diseño experimental abordado permitió comenzar con ladilucidación de las bases moleculares de la resistencia en ambos modelos deestudio, sorteando la complejidad biológica de los mismos, y generandoherramientas sistematizadas para futuras investigaciones.