Evaluación de la expresión de CD47 y CD44 en linfocitos B de pacientes con síndromes linfoproliferativos crónicos B

LUJÁN BRAJOVICH M; COTORRUELO C; MATTALONI S; BIONDI C; ENSINCK A; GARCÍA BORRÁS S

Rosario

Congreso; XXI Congreso y XXXIX Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2019

Sociedad de Biología de Rosario

Las proteínas transmembrana CD47 y CD44 se expresan en diversos tejidos entre ellos el sistema hematológico. La glicoproteína CD47 actúa como marcador de lo propio, limitando la fagocitosis a través de su interacción con la proteína reguladora de señal α (SIRPα) expresada en macrófagos. Estudios recientes evidencian que el bloqueo del eje CD47/SIRPα mejora la actividad fagocítica de los macrófagos hacia las células tumorales. La molécula de adhesión CD44 se expresa en varios tipos de células y participa en diferentes vías de señalización que median la proliferación, migración, hematopoyesis, activación de linfocitos y tráfico entre los ganglios linfáticos. El objetivo de este trabajo fue analizar la expresión de CD47 y CD44 en linfocitos B (LB) de pacientes con diagnóstico de síndrome linfoproliferativo crónico B (SLPC-B). Se trabajó con muestras de sangre periférica (n=22) provenientes de dadores voluntarios sin patología demostrable (grupo control) y pacientes con SLPC-B (n=16) provenientes del Servicio de Hematología del Hospital Provincial del Centenario. La evaluación de la expresión de CD44 y CD47 se realizó por citometría de flujo (CMF). 50 μL de sangre entera fue incubada 30 minutos con 5 μL de cada uno de los siguientes anticuerpos monoclonales: CD45 FITC, CD47 PE, CD19 PE-Cy7 y CD44 APC. Luego de la lisis de los eritrocitos se realizó un lavado con PBS-Albúmina 0,5% y las células fueron resuspendidas en diluyente FACSFlow. Se utilizó un citómetro FACSAria II y el programa FACSDiva (BD) para el análisis. Los niveles de expresión de CD44 y CD47 fueron evaluados por medio de la relación de la intensidad de fluorescencia de cada marcador correspondiente a LB respecto a la obtenida para linfocitos no B (LnoB). Para la expresión de CD47, el valor de media aritmética (desvío estándar) correspondiente a la relación LB/LnoB para el grupo de pacientes con SLPC-B fue 1,59 (0,53) y para el grupo control el valor fue 1,18 (0,15). Para la comparación de los valores obtenidos se utilizó la prueba t de Student. El valor medio de la relación LB/L no B en los pacientes con SLPC-B es significativamente mayor (p=0,004). Para CD44 se compararon las medianas de la relación LB/LnoB en pacientes con SLPC-B con controles utilizando el test de Mann-Whitney por no cumplirse el supuesto de normalidad para los controles. La mediana (rango intercuartil) de la relación LB/LnoB en los controles 0,93 (0,14) es significativamente mayor a la de los pacientes con SLPC-B 0,655 (0,38) (p=0,0002). Posibles cambios conformacionales de CD47 conducidos por estrés oxidativo indicarían su mayor expresión en respuesta a daño intracelular o procesos de envejecimiento celular. La interacción CD47/SIRPα actuaría como un punto de control inmune mieloide específico, el bloqueo de CD47/SIRPα constituye una estrategia prometedora para el tratamiento del cáncer basado en la modulación de las respuestas inmunes innatas y adquiridas hacia las células tumorales. La disminución de CD44 en pacientes con SLPC-B evidenciaría su participación en el proceso de malignidad. Sin embargo, es necesario seguir examinando los mecanismos biológicos subyacentes. La incorporación de CD47 y CD44 en los paneles recomendados para el estudio del inmunofenotipo por CMF sería de gran utilidad para el diagnóstico y pronóstico de pacientes con SLPC-B.