Desarrollo de una estrategia molecular para la detección de individuos portadores del alelo KEL*02N.06

MATTALONI S; LUJÁN BRAJOVICH M; TRUCCO BOGGIONE C; RUCCI A; GARCÍA BORRÁS S; BIONDI C; COTORRUELO C

Rosario

Congreso; XVII Congreso y XXXV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2015

Sociedad de Biología de Rosario

El fenotipo KEL nulo (K0) se caracteriza por la ausencia de la glicoproteína Kell en la membrana eritrocitaria. Los individuos portadores de este fenotipo de muy baja frecuencia, son altamente susceptibles de desarrollar un aloanticuerpo (anti-Ku) luego de transfusiones o embarazos que reacciona con todos los glóbulos rojos excepto con aquellos de fenotipo K0. Anti-Ku es clínicamente significativo debido a su alta capacidad hemolítica y es responsable de Reacciones Hemolíticas Postransfusionales y de la Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal. Los pacientes con anti-Ku que requieren transfusiones difícilmente pueden recibir unidades compatibles y deben ingresar en un protocolo transfusional de alto riesgo indicado solo para situaciones extremas. En estudios previos hemos caracterizado a nivel molecular el alelo responsable de un fenotipo K0 en una paciente embarazada con anti-Ku. Los estudios de secuenciación demostraron que la paciente portaba el alelo KEL*02N.06 en homocigosis. El objetivo de este trabajo fue desarrollar una estrategia molecular basada en PCR SSP para identificar individuos portadores del alelo KEL*02N.06 en el grupo familiar de la paciente para identificar donantes compatibles ante posibles demandas transfusionales. Utilizando el programa informático Primer3 (http://bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0/primer3/) se diseñaron un par de oligonucleótidos cebadores para detectar el nucleótido G en la posición IVS3+1 presente en todos los alelos KEL y otro par de oligonucleótidos cebadores para detectar el nucleótido A en la posición IVS3+1 presente en el alelo KEL*02N.06. Para establecer las condiciones óptimas de reacción se utilizaron muestras de ADN de la paciente (genotipo KEL*02N.06 / KEL*02N.06) y de un individuo normal (genotipo KEL*01 / KEL*02). Con esta estrategia es posible detectar el alelo KEL*02N.06 en doble o simple dosis. Posteriormente se obtuvo ADN genómico de 7 miembros de la familia de la paciente a través del método de salting-out y se realizaron los estudios moleculares. Los resultados obtenidos mostraron que 6 miembros de la familia (madre, 3 hermanos y 2 hijos de la paciente) son portadores del alelo KEL*02N.06 en estado heterocigota y 1 miembro (esposo de la paciente) no es portador de este alelo. Estos hallazgos indican que los miembros del grupo familiar no son donantes compatibles en lo que respecta al sistema Kell ya que ninguno de ellos porta el alelo KEL*02N.06 en dosis doble y por lo tanto todos expresan la glicoproteína Kell en la membrana eritrocitaria. El estudio molecular realizado permitió también brindar un asesoramiento genético a las hermanas de la paciente al indicarles que ellas no están en riesgo de desarrollar un anti-Ku. Debido a la dificultad que supone conseguir sangre compatible para la paciente al no encontrar donantes en el entorno familiar, se recomienda, dentro de las posibilidades, implementar un programa de transfusión autóloga ante situaciones con potenciales demandas de sangre.