Desarrollo de dos enzimoinmunoensayos competitivos para la detección de trazas de soja y de huevo en pastas secas.

CELLERINO K,; GUSTAVO POLENTA; RODRÍGUEZ VIVIANA;; LAURA BEATRIZ LÓPEZ; DOCENA G

. Córdoba. Argentina.

Congreso; VI Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de los Alimentos Córdoba 2016 (CICYTAC 2016); 2016

CICYTAC 2016

El objetivo del presente trabajo fuedesarrollar dos enzimoinmunoensayos  competitivos, uno para  detectar presencia de trazas de soja  y otro para detectar presencia de trazas dehuevo, ambos en pastas secas. Se trabajó con dos antisueros policlonalesde conejo específicos de proteínas de soja y  de proteínas de huevo como anticuerpos  primarios. Para cada enzimoinmunoensayo sedeterminó la concentración óptima de antígeno (extracto de proteínas de soja ode huevo) a inmovilizar en la placa y la concentración de anticuerpo primariopara ser utilizada en la competencia. Se ajustó la curva de calibraciónutilizando concentraciones crecientes de un extracto de producto de soja o de huevo entero en polvo extraído conbuffer Tris-HCL 0,0625M con 3% de SDS y 2% de mercaptoetanol. El rangode trabajo utilizado en el enzimoinmunoensayo para detectar soja fue 15-420 ppmde proteína de soja (PS) con una adecuada linealidad (R2: 0,988). En el caso del enzimoinmunoensayopara detectar huevo el rango de trabajo utilizado fue 20-630 ppm de proteína dehuevo (PH) con una adecuada linealidad  (R2:0,9564). Se evaluaron los parámetros de validación: límite de detección(LD) y de cuantificación (LC), recuperación y precisión en el día y entre días.Con respecto al enzimoinmunoensayo para detectar soja el LD fue 47,0 ppm de PS,el LC fue 76,0 ppm PS, la precisión en el día 12,7 (n=3) y entre días 15,0 (n=9).En el caso del enzimoinmunoensayo para detectar huevo el LD fue 23,0 ppm de PH,el LC fue 45,0 ppm PH, la precisión en el día 2,7 (n=3) y entre días 6,8 (n=9).Se analizaron sistemas modelo de pastas secas con 300 y 150 ppm PS o PH. Larecuperación resultó adecuada en ambos casos (106,3% para soja y 104,7% parahuevo). Además, se analizaron muestras comerciales de pastas secas con los enzimoinmunoensayos desarrollados y con dos kits comercialesde R-Biopharm. En algunas muestras tanto los enzimoinmunoensayos competitivos como los kits comerciales permitieronla cuantificación de  PS y PH, mientrasque en otras ni los  enzimoinmunoensayos competitivosni los kits comerciales detectaron PS ni PH. En otras muestras los enzimoinmunoensayos no detectaronPS ni PH sin embargo si se detectaron y cuantificaron  dichas proteínas utilizando los kits comercialesde R-Biopharm. Dado el bajo costo de los enzimoinmunoensayos competitivos desarrollados sepodrían utilizar como métodos de screening. Cuando esta metodología resultenegativa se debería confirmar con un método más sensible (kit de ELISAcomercial) para asegurar la ausencia de PS o de PH. UBACYT 20020120100175BA