CAMBIOS MOLECULARES A NIVEL DE LA RESPUESTA INMUNE LOCAL ANTE LA INFECCIÓN EXPERIMENTAL POR HERPESVIRUS EQUINO 1 EN EL MODELO RATÓN BALB/C.

BRAVI ME; SGUAZZA GH; SCROCHI MR; FUENTEALBA NA; NISHIDA F; ORSINI DELGADO L; SMALDINI P; DOCENA G; BARBEITO CG; MUGLIA CI; ZANUZZI CN; GALOSI CM

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virologia y II Simposio de Virologia Veterinaria; 2015

Asociacion Argentina de Microbiologia

El Herpesvirus equino 1 (EHV-1) es un patógeno endémico que genera pérdidas económicas en la industria hípica. Produce signos respiratorios, nerviosos, abortos y síndrome neonatal. Si bien aun no han sido dilucidados todos los aspectos sobre la patogenia del aborto, esta presentación requiere del establecimiento de una fase virémica que permita la llegada del virus al útero. Como se ha demostrado en otros procesos infecciosos, nuestra hipótesis es que la infección modifica el perfil de citoquinas uterinas hacia un predominio de aquellas que pueden determinar la interrupción de la preñez. La mayoría de las investigaciones relacionadas con el aborto por EHV-1 han sido realizadas utilizando el modelo murino BALB/c, que permite obtener datos completos, comparables y extrapolables al equino. El objetivo de este trabajo fue analizar cambios a nivel de la respuesta inmune local en úteros al día 3 posinfección (tiempo seleccionado según ensayos previos en los que hemos estandarizado el momento óptimo para los análisis histopatológicos, inmunohistoquímicos y moleculares) que podrían intervenir en la interrupción de la gestación en hembras desafiadas con el virus por vía intranasal. Todos los estudios del presente trabajo se realizaron comparativamente con ratonas controles inoculadas con medio de cultivo. Se cuantificó además el ARNm, por PCR en tiempo real (qPCR), de los genes que codifican para IL-10, TNF e IFN-γ utilizando primers específicos/SYBR green. Por ELISA (IFN-γ e IL13) y por Citometría de Flujo (CBA, Becton Dickinson) (TNF) se midieron los niveles de expresión de las proteínas producidas. Para la realización de estas últimas técnicas las muestras se homogenizaron y se trataron con inhibidor de proteasas. En la necropsia se observó que el número de unidades fetoplacentarias en los animales infectados fue menor que la media para la cepa utilizada pudiendo indicar el suceso del aborto. La cuantificación relativa por qPCR expresada como 2-∆∆Ct (cantidades en número de veces con respecto al calibrador de βactina) indicó diferencias del grupo infectado respecto al control, para los genes amplificados. La diferencia de expresión de las citoquinas, analizada por la prueba de T de Student indicó diferencias significativas. Se concluye que hay un aumento de TNF que indica un fuerte incremento de respuesta Th1 y aumento de IFN-γ que concuerda con una infección viral. Además el aumento moderado de IL-10, de respuesta Th2 y tolerogénica, podría atribuirse a una respuesta para restaurar el balance homeostático ante la infección.