IIFP   25103
INSTITUTO DE ESTUDIOS INMUNOLOGICOS Y FISIOPATOLOGICOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
El Herpesvirus equino 1 interfiere con la apoptosis en células infectadas
Autor/es:
SCROCHI MR; BRAVI ME; FUENTEALBA NA; GIMENO EJ; PORTIANSKY EL; BARBEITO CG; ZANUZZI CN; MUGLIA CI; GALOSI CM
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XI Congreso Argentino de Virología. II Congreso Latinoamericano de Virología, IV Simposio Argentino de Virología clínica y II Simposio Argentino de Virología Veterinaria; 2015
Resumen:
El Herpesvirus equino 1 (EHV-1) produce signos respiratorios, nerviosos, aborto y síndrome neonatal en equinos, causando importantes pérdidas económicas. En las células la muerte por apoptosis actúa como un mecanismo de protección celular frente a la infección debido a que es un proceso programado con la finalidad de eliminar aquellas células potencialmente peligrosas para el organismo. En otros alphaherpesvirus, se han identificado acciones implicadas con la modulación de la apoptosis, sin embargo ésto no fue aún estudiado en el EHV-1. El objetivo de este trabajo fue evaluar en cultivos de células equinas, el efecto modulatorio sobre la apoptosis, del EHV-1 durante su ciclo de replicación. Se utilizaron células de cultivo primario de riñón equino crecidas con Medio Mínimo Esencial suplementado con glutamina, antibióticos y 10% de suero fetal bovino, infectadas con la cepa AR8 (MOI=10) y recolectadas a las 3, 9, y 18 hs posinfección (pi). Simultáneamente se realizaron controles de inducción a la apoptosis (incubación con sorbitol 1M durante 1 h a 37 °C) y controles negativos (sin tratamiento). La evaluación se realizó mediante tinción con bromuro de etidio y naranja de acridina (BE/NA) para la observación de compactación y fragmentación nuclear; Anexina V/ioduro de propidio por citometría de flujo para la detección de la exteriorización de fosfatidilserina; medición de actividad de caspasa 3 mediante incubación de los lisados celulares con el sustrato fluoregénico específico y determinación de cambios ultraestructurales por microscopía electrónica de transmisión (MET). El análisis por BE/NA determinó que a lo largo de todo el ciclo de replicación viral, el índice de apoptosis fue significativamente menor en los grupos infectados respecto al control positivo de la misma. El análisis de la exteriorización de fosfatidilserina reveló que a las 3 y 9 hs pi el porcentaje de marcación en los grupos infectados fue significativamente menor respecto al grupo 18 hs pi y al control positivo de apoptosis. La evaluación de la actividad de caspasa 3 reveló, en la totalidad de los grupos infectados, valores significativamente menores respecto del control positivo de apoptosis. Por MET se confirmó la presencia de partículas virales y cambios ultraestructurales característicos del proceso apoptótico. Resultados similares fueron encontrados con experiencias en células heterólogas (MDBK). Se concluye que la infección por EHV-1 interfiere con la muerte por apoptosis en las células infectadas durante su ciclo de replicación viral, estrategia utilizada por el virus para asegurar su ciclo de vida.