Participacion de diferentes poblaciones celulares del huésped en el fenomeno STIR detectado en las infecciones de Bordetella pertussis

ZURITA EUGENIA; MORENO GRISELDA; GAILLARD EMILIA; BOTTERO DANIELA; RUMBO MARTÍN; HOZBOR DANIELA

Mar del Plata

Congreso; LIX Reunion anual científica de la Socieda Argentina de Investigacion Clinica y LXII Reunion anual científica de la Socieda Argentina de Inmunologia; 2014

La estimulación exacerbada de la respuesta inmune innata (StIR) en vías aéreas evita el progreso de las infecciones pulmonares causadas por Bordetella pertussis. Recientemente hemos demostrado que este fenómeno es inducido in vivo por LPS vía TLR4 e implica la producción de especies reactivas al oxígeno (ROS). El objetivo de este trabajo fue identificar la contribución al fenómeno StIR de poblaciones celulares presentes en el pulmón del huésped. En particular evaluamos la contribución de las células epiteliales (células de línea A549, Neumocitos tipo II) y de los macrófagos alveolares (MA, extraídos de ratones). Para evaluar la capacidad de estas células de producir ROS realizamos como primera medida un ensayo para ajustar las condiciones de trabajo in vitro, utilizando diferentes dosis de LPS (0,1; 0,5 y 1 µg)y distintos tiempos de estimulación (1, 2, 3, 4 y 24 h).Pudimos establecer que a las 2h y con una concentración de 0,5 µg de LPS los niveles de ROS medidos por el método de DCFH-DA respecto del control sin LPS fueron: para las A549 2,95 ± 1,07 vs 1,01 ± 0,19 y para los MA 2,59 ± 1,50 vs 1,00 ± 1,39. En base a estos resultados procedimos a evaluar si en estas condiciones el ROS inducido por el LPS es capaz de eliminar a B. pertussis según observaramos in vivo. Para ello se coincubó B. pertussis (MOI 100:1) con las células A549 o MA por 2h en presencia de 0,5 µg de LPS. Los recuentos bacterianos mostraron que los MA fueron capaces reducir el número de bacterias extracelulares (15 veces menos respecto del control) y las A549 las intracelulares. Los resultados presentados parecen indicar que tanto los Neumocitos tipo II como los macrófagos alveolares presentan capacidad para producir ROS en respuesta a la estimulación con LPS y que esta respuesta se correlacionaría con su capacidad para inducir la muerte de B. pertussis intracelularmente en el caso de los Neumocitos tipo II y extracelularmente en el caso de los macrófagos alveolares.