3. Estudio de la migración dependiente de Aquaporina 2 (AQP2) en la línea celular renal mpkCCDc14.T

MENDIVIL TOMAS; PIZZONI ALEJANDRO; CAPURRO CLAUDIA; RIVAROLA VALERIA; DI GIUSTO GISELA; BELTRAMONE NATALIA; FORD PAULA

La Plata

Congreso; Reunión anual de la Sociedad Argentina de Fisiología.; 2016

SAFIS

La migración es un proceso que implica cambios delvolumen celular: una característica comúndelas células migrantes es la polarización dentro del plano de movimientooriginando un lamelipodio y un cuerpo celular. Nuestros resultados previos,utilizando como modelos experimentales dos líneascelulares de túbulo colector cortical renal(RCCD1) -una transfectada que expresa constitutivamente AQP2 en lamembrana apical y otra que no-, mostraron que lapresencia de AQP2 favorece la migración celular.El objetivo delpresente trabajo consistió en corroborar dichos resultados utilizando otromodelo de células de túbulo colector cortical: mpkCCDc14, que expresa endógenamente AQP2. La ventaja de estalínea radica en la posibilidad de estimularla con cAMP o AVP para producir laincorporaciónde AQP2 en la membrana apical, tal como ocurre fisiológicamente enlos túbulos renales. En este modelo evaluamos la participación de AQP2 en la migraciónrealizandoel ensayo de cicatrización de herida (woundhealing)y midiendo el % de cicatrización de la monocapa a las 4 hs. Luego, mediante inmunofluorescenciautilizando un marcador de membrana plasmática, realizamos la determinacióndelvolumen celular yde los lamelipodios de las células migrantes. Los resultadosdel woundhealing mostraron que lascélulas estimuladas, con dbAMPc o con AVP, cubren una mayor superficie deherida que las células control no estimuladas(Control: 55 ± 2%, n=13; dbAMPc: 60± 2%*, n=11; AVP: 67 ± 2%***, n=8; *p<0,05, ***p<0.001).En cuanto al análisisdel volumen los resultados mostraron que si bien las células migrantes estimuladas-con dbAMPc o con AVP- tienen una tendencia a reducir su volumen celular estadiferencia no es significativa respecto a las no estimuladas(Control: 5261 ± 801µm3,n=12; dbAMPc: 4301 ± 465µm3, n=11; AVP 3692 ± 390µm3, n=7).Sinembargo, analizandoel volumen de los lamelipodiosde células no estimuladasencontramos que son significativamente mayores que los de las estimuladas(Control: 1305 ± 263µm3, n=12; dbAMPc: 678 ± 113µm3*,n=11; AVP:646 ± 86µm3*, n=7; *p<0,05).En base a los resultadosobtenidosen nuestro nuevo modelo experimental afirmamos que la presenciade AQP2 favorece lamigración celular. El volumen dellamelipodiode las célulasque expresan AQP2 en la membrana apicalresultó sermenor que en células controlpor lo que suponemos estarían facilitados los flujos de agua. Por lo tanto,proponemos que los cambios rápidos y localizados del volumen del lamelipodiodependientes de AQP2 resultarían claves para el favorecimiento del proceso demigración celular.