Proliferación dependiente de Acuaporina 2 (AQP2) en un modelo de células principales de túbulo colector cortical renal: las mpkCCDc14.

DI GIUSTO GISELA; PIZZONI ALEJANDRO; FORD PAULA; RIVAROLA VALERIA; CHRISTENSEN M J; CAPURRO

La Plata

Congreso; Reunión anual de la Sociedad Argentina de Fisiología.; 2016

SAFIS

Nuestros estudios previos, utilizando comomodelos experimentales dos líneas celulares de túbulo colector cortical renal(RCCD1) ? una transfectada expresando establemente la AQP2en la membrana apical y otra que no- mostraron que la presencia de AQP2 inducíauna aceleración del ciclo celular mediada en parte por un aumento de losmecanismos RVI (Regulatory VolumeIncrease) dependientes de la isoforma 2 del intercambiador Na+/H+(NHE2). El objetivo de este trabajo fue corroborar estos resultados en unmodelo más fisiológico de células principales de colector cortical: las mpkCCDc14,que expresan endógenamente la AQP2. Para ello realizamos experimentos deinmunoblot para la AQP2 y NHE2, conteo celular por cámara de Neubauer ymedición de RVI mediante el Scepter CellCounter. Trabajos previos mostraron que las mpkCCDc14 expresanAQP2 al ser estimuladas durante 24hs por AVP sobre un soporte permeable pero noen uno impermeable (Hasler et al 2002).Nuestros estudios muestran que la AVP 10nM y el  dbAMPc 100uM son capaces de aumentar laexpresión de AQP2 en estas células crecidas sobre soporte impermeable al serestimuladas durante al menos 4 días. La proliferación de las células inducidaspor AVP o dbAMPc se encuentra aumentada (Número de células, 104: control=3.3±0.4, AVP= 6.2±0.3 p<0.01 n=20; dbAMPc= 5.1±0.6 p<0.05n=30). Por otra parte observamos que las células inducidas con dbAMPc expresan una mayor cantidad de NHE2 en membranasplasmáticas biotinilizadas (NHE2/Estreptavidina, unidades arbitrarias: control=0.88±0.07 vs dbAMPc= 1.50±0.15, p<0.05 n=6). Solo la proliferación de las célulasmpkCCDc14 inducidas es sensible a la inhibición de NHE2 por HOE-69415µM (Número de células 104: +NHE2= 5.1±0.6vs -NHE2= 3.2±0.5, p<0.05 n=30). Nuestros experimentos de volumen mostraronque el porcentaje de RVI en respuesta a un shock hiperosmótico de las célulasmpkCCDc14 inducidas, pero no el de las control, aumenta durante lafase S del ciclo celular (%RVI con dbAMPc: Fase G1= 1.33±1.33 vs Fase S=15.33±2.90, p<0.05 n=6). Finalmente, observamos que en las células inducidasél % de RVI de la fase S era sensible a la inhibición del NHE2 (%RVI con dbAMPc:+NHE2= 11.67±2.33 vs ?NHE2= 0±0.0, p<0.01 n=6).  En conjunto los resultados corroboran en unmodelo fisiológico más cercano a lo que ocurre en los túbulos colectores renalesnativos que la AQP2 induce un aumento de la proliferación a través laactivación de mecanismos de RVI dependientes de NHE2.