CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

En la retina, las células de Müller controlan la homeostasis del medio extracelular donde la actividad neuronal altera los gradientes osmóticos favoreciendo el swelling celular. Este swelling es seguido de una respuesta reguladora de descenso de volumen (RVD), mediado parcialmente por un flujo isosmótico de KCl y agua a través de canales iónicos y de la AQP4. Sin embargo poco se conoce acerca de la cascada de señalización intracelular que en muchos tipos celulares involucra al calcio (Ca2+). El objetivo de este trabajo fue estudiar el rol del Ca+2 y la participación del canal de Ca2+ mecanosensible TRPV4 en el proceso de RVD en la línea derivada de células humanas de Müller MIO-M1. Los cambios en los niveles de Ca2+ intracelular y en el volumen celular fueron estudiados empleando la sonda fluorescente FURA-2 AM en medios iso e hipotónicos en presencia y ausencia de Ca2+ externo y de estimuladores o inhibidores específicos. Los resultados mostraron que durante el swelling osmótico, el Ca2+ intracelular incrementó un 4-5%, de manera independiente del TRPV4, ya que el tratamiento con su inhibidor específico RN1734 no modificó dicho incremento. En medio libre de Ca2+, este aumento se redujo significativamente pero existe un menor aumento que probablemente se deba a la liberación de Ca2+ desde los depósitos intracelulares. Si bien el RVD mostró ser independiente del Ca2+ extracelular, la depleción de los depósitos intracelulares de Ca2+ con tapsigargina (TG) en medio libre de Ca2+ impidió el RVD. Por otra parte, la activación farmacológica del TRPV4 con el agonista 4α-PDD 10 µM produce un gran incremento del Ca2+ intracelular lo que aumenta la eficiencia del RVD. Asimismo, la activación de la entrada de Ca2+ por vaciamiento de depósitos (SOCE) mediante el tratamiento con TG en presencia de Ca2+ extracelular, induce un gran incremento sostenido de Ca2+ intracelular que potencia el RVD. En conjunto estos resultados muestran que, en células de Müller, el proceso de RVD es independiente del influjo de Ca2+ extracelular, sin embargo el Ca2+ intracelular, y en particular, los depósitos sensibles a TG, son esenciales para este proceso. Tanto la activación farmacológica del TRPV4 como la inducción de una SOCE, que generan grandes incrementos de Ca2+ intracelular, potencian el RVD, probablemente activando mecanismos adicionales de regulación de volumen.