IFIBIO HOUSSAY   25014
INSTITUTO DE FISIOLOGIA Y BIOFISICA BERNARDO HOUSSAY
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
PARTICIPACIÓN DE LAS AQPS EN LA MIGRACIÓN E INVASIÓN DE CÉLULAS DEL CITOTROFOBLASTO HUMANO
Autor/es:
RECA A; REPPETTI J; MARTÍNEZ N.; DAMIANO A
Lugar:
La Plata
Reunión:
Congreso; II Congreso Internacional - Facultad de Ciencias Médicas; 2015
Resumen:
INTRODUCCION: Las acuaporinas seencuentran expresadas en la placenta y en las membranas fetales donde modulanel transporte de agua, sin embargo nuevos roles para estos canales han surgidorecientemente, destacándose su participación en fenómenos de migración celular.El establecimiento de la placenta requiere que las células del citotrofoblastoadquieran un fenotipo invasivo que les permita invadir y remodelar lavasculatura uterina para asegurar un apropiado flujo sanguíneo e intercambiofeto-placentario. Una invasión desregulada puede desencadenar patologías conmuerte materna debido a hemorragia y en el extremo opuesto, un bloqueo excesivode la misma compromete el flujo sanguíneo hacia el feto pudiendo originar prematurez,restricción del crecimiento intrauterino y preeclampsia. La preeclampsia es unacomplicación obstétrica común que puede llevar a morbi-mortalidad materna fetalcuyos signos clínicos incluyen hipertensión, edema y proteinuria.OBJETIVO: Evaluar el rol de lasAQPs en la migración e invasión de células del citotrofoblasto humano duranteel primer trimestre de gestación.   MATERIALES Y METODOS: Línea celular utilizada: La línea celular decitotrofoblasto humano de primer trimestre, Swan 71, fue mantenida en DMEM/F12suplementado con 10% SFB y antibióticos a 37ºC en 5% de CO2. Se caracterizo el perfil deAQPs presente en la línea celular por medio de WB e inmunofluorescencia. Laviabilidad celular en cada condición ensayada se evaluó por medio del ensayo deMTT. Ensayo wound healing: Monocapas confluentes fueronsometidas a un arresto de 18 horas previo a realizar manualmente el wound yse evaluó el cierre del mismo a las 8, 18 y 24 horas en 5 condicionesexperimentales: Control (DMEM/F12 0,5% SFB), Inhibición no selectiva de AQPs(50 μM HgCl2), Inhibición deAQP1 (100 μM Cloruro de tetraetilamonio), Inhibición de AQP3 (100 μM CuSO4)e Inhibición de AQP9 (100 μM Floretina). Ensayo de invasión en transwells coateadoscon ECM®: luego del tratamiento con HgCl2 las células fueronsembradas en transwells de 8 µm de poro precoateados con matriz extracelular yse evaluó la invasión a las 24 hs. Las células incapaces de invadir fueroneliminadas por hisopado y las invasoras (ubicadas en el lado inferior) fueronfijadas con metanol y teñidas con hematoxilina-eosina para su recuento.RESULTADOS: Ensayowound healing: El tratamiento con HgCl2 redujosignificativamente la cobertura de la herida con respecto al control a las 8 (10.36 ± 1.496 vs. 20.77 ± 1.234,n=6, p < 0.05), 18 (25.64 ± 2.865 vs. 47.50 ± 1.824,n=6, p < 0.05) y 24 hs (33.00 ±2.459 vs. 56.34 ± 1.220, n=6, p < 0.05).No se observaron diferencias con el control en el caso de los tratamientos concloruro de tetraetilamonio y floretina. El tratamiento con CuSO4redujo significativamente cobertura de la herida con respecto al controla las 8 (14.44 ± 1.205vs. 20.77 ± 1.234, n=6, p < 0.05), 18 (40.40 ± 2.327 vs. 47.50 ± 1.222,n=6, p < 0.05) y 24 hs (49.75 ±2.380 vs. 56.34 ± 1.220, n=6, p < 0.05).Ensayo de invasiónen transwells coateados con ECM®: el tratamiento conHgCl2 atenuó la capacidad invasiva de la línea celular con respectoal control (30 ± 4 células/campo vs. 3 ± 1células/ campo, n=3, p < 0.05),