IFIBIO HOUSSAY   25014
INSTITUTO DE FISIOLOGIA Y BIOFISICA BERNARDO HOUSSAY
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
AQP2 modula la entrada capacitativa de calcio facilitando el acoplamiento TRPV4-SK3
Autor/es:
ALEJANDRO PIZZONI; JUANA RAJOY; GISELA DI GIUSTO; VALERIA RIVAROLA; CAPURRO CLAUDIA; PAULA FORD
Lugar:
Mar del Plata, Argentina
Reunión:
Congreso; LX Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)-Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología 2015; 2015
Resumen:
AQP2 MODULA LA ENTRADA CAPACITATIVA DECALCIO FACILITANDO EL ACOPLAMIENTO TRPV4-SK3.Alejandro Pizzoni; Juana Rajoy; Gisela Di Giusto; Valeria Rivarola;Claudia Capurro; Paula Ford Lab de Biomembranas, IFIBIO HoussayEn distintos sistemas se ha descripto que la entrada de Ca2+ a travésde canales TRPV4 conduciría a la activación local de canales de K+activados por calcio (KCa) produciendo una hiperpolarización.Previamente describimos en células renales que el canal de aguaAcuaporina2 (AQP2) y el canal de calcio (TRPV4) actuarían en formaconjunta para sensar cambios de osmolaridad y activar mecanismosde regulación del volumen vinculados a la salida de K+. El objetivo denuestro actual trabajo fue estudiar los cambios de potencial demembrana que se producen en las células renales al activar el TRPV4en función de la presencia de AQP2 y su influencia en la entradacapacitativa de Ca2+. Utilizando distintos fluoróforos estudiamos loscambios en el potencial de membrana (Dibac4(3)) y en la entrada decalcio (Fura2-AM) que ocurren al activar el TRPV4. Realizamosexperimentos en dos líneas celulares renales; una que no expresaAQP2 (WT-RCCD1) y otra transfectada con AQP2 (AQP2-RCCD1).Encontramos que, utilizando un activador específico del TRPV4 (4-α-PDD, 10 μM), las células WT se despolarizan y las AQP2 sehiperpolarizan. Esta hiperpolarización no ocurre en presencia deapamina (300 nM) lo que indicaría que en las células AQP2 laactivación de TRPV4 lleva a su vez a la activación un KCa, el SK3. Porotra parte, utilizamos un protocolo clásico para el estudio de la entradacapacitativa de calcio que se produce al vaciar los depósitos porincubación con tapsigargina (1 μM). Encontramos que al activar el TRPV4 con 4-α-PDD, la entrada capacitativa fue mayor en las célulasque expresan AQP2 respecto de las WT (Área bajo la curva AQP2:2491 ± 149, WT: 1298 ± 95 p