AQP2 modula la entrada capacitativa de calcio facilitando el acoplamiento TRPV4-SK3.

PIZZONI ALEJANDRO; RAJOY JUANA; DI GIUSTO GISELA; RIVAROLA VALERIA; CAPURRO CLAUDIA; FORD PAULA

Pizzoni A, Rajoy J, Di Giusto G, Rivarola V, Capurro C, Ford P.

Congreso; Reunión anual conjunta 2015 SAFIS-SAIC. Mar del Plata, Noviembre de 2015; 2015

SAIC SAFIS

En distintos sistemas se ha descripto que la entrada de Ca2+ a travésde canales TRPV4 conduciría a la activación local de canales de K+activados por calcio (KCa) produciendo una hiperpolarización.Previamente describimos en células renales que el canal de aguaAcuaporina2 (AQP2) y el canal de calcio (TRPV4) actuarían en formaconjunta para sensar cambios de osmolaridad y activar mecanismosde regulación del volumen vinculados a la salida de K+. El objetivo denuestro actual trabajo fue estudiar los cambios de potencial demembrana que se producen en las células renales al activar el TRPV4en función de la presencia de AQP2 y su influencia en la entradacapacitativa de Ca2+. Utilizando distintos fluoróforos estudiamos loscambios en el potencial de membrana (Dibac4(3)) y en la entrada decalcio (Fura2-AM) que ocurren al activar el TRPV4. Realizamosexperimentos en dos líneas celulares renales; una que no expresaAQP2 (WT-RCCD1) y otra transfectada con AQP2 (AQP2-RCCD1).Encontramos que, utilizando un activador específico del TRPV4 (4-α-PDD, 10 μM), las células WT se despolarizan y las AQP2 sehiperpolarizan. Esta hiperpolarización no ocurre en presencia deapamina (300 nM) lo que indicaría que en las células AQP2 laactivación de TRPV4 lleva a su vez a la activación un KCa, el SK3. Porotra parte, utilizamos un protocolo clásico para el estudio de la entradacapacitativa de calcio que se produce al vaciar los depósitos porincubación con tapsigargina (1 μM). Encontramos que al activar el TRPV4 con 4-α-PDD, la entrada capacitativa fue mayor en las célulasque expresan AQP2 respecto de las WT (Área bajo la curva AQP2:2491 ± 149, WT: 1298 ± 95 p