IFIBIO HOUSSAY   25014
INSTITUTO DE FISIOLOGIA Y BIOFISICA BERNARDO HOUSSAY
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
AQP2 MODULA LA ENTRADA CAPACITATIVA DE CALCIO FACILITANDO EL ACOPLAMIENTO TRPV4-SK3
Autor/es:
ALEJANDRO PIZZONI; JUANA RAJOY; GISELA DI GIUSTO; VALERIA RIVAROLA; CLAUDIA CAPURRO; PAULA FORD
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LX REUNIÓN DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACIÓN CLÍNICA (SAIC) Y REUNIÓN ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE FISIOLOGÍA (SAFIS); 2015
Institución organizadora:
SAIC-SAFIS
Resumen:
Resumen :En distintos sistemas se ha descripto que la entrada de Ca2+ a través de canales TRPV4 conduciría a la activación local de canales de K+ activados por calcio (KCa) produciendo una hiperpolarización. Previamente describimos en células renales que el canal de agua Acuaporina2 (AQP2) y el canal de calcio (TRPV4) actuarían en forma conjunta para sensar cambios de osmolaridad y activar mecanismos de regulación del volumen vinculados a la salida de K+. El objetivo de nuestro actual trabajo fue estudiar los cambios de potencial de membrana que se producen en las células renales al activar el TRPV4 en función de la presencia de AQP2 y su influencia en la entrada capacitativa de Ca2+. Utilizando distintos fluoróforos estudiamos los cambios en el potencial de membrana (Dibac4(3)) y en la entrada de calcio (Fura2-AM) que ocurren al activar el TRPV4. Realizamos experimentos en dos líneas celulares renales; una que no expresa AQP2 (WT-RCCD1) y otra transfectada con AQP2 (AQP2-RCCD1). Encontramos que, utilizando un activador específico del TRPV4 (4-α-PDD, 10 µM), las células WT se despolarizan y las AQP2 se hiperpolarizan. Esta hiperpolarización no ocurre en presencia de apamina (300 nM) lo que indicaría que en las células AQP2 la activación de TRPV4 lleva a su vez a la activación un KCa, el SK3. Por otra parte, utilizamos un protocolo clásico para el estudio de la entrada capacitativa de calcio que se produce al vaciar los depósitos por incubación con tapsigargina (1 µM). Encontramos que al activar el TRPV4 con 4-α-PDD, la entrada capacitativa fue mayor en las células que expresan AQP2 respecto de las WT (Área bajo la curva AQP2: 2491 ± 149, WT: 1298 ± 95 p