EFECTOS DE LA EXPOSICION PROLONGADA A NIVELES ELEVADOS DE T4 SOBRE LA DIFERENCIACION NEURONAL Y ANGIOGENESIS DURANTE LA REGENERACION RETINIANA DE ZEBRAFISH ADULTO

BEJARANO, CLAUDIO ALEJANDRO; LEGAZ, GUILLERMINA; FAILLACE, MARÍA PAULA

C.A.B.A

Congreso; XIX Congreso de la Sociedad Argentina de Endocrinología y Metabolismo; 2015

Sociedad Argentina de Endocrinología y Metabolismo

Introducción y Objetivos:Las hormonas tiroideas ejercen sus efectos a través de su unión con receptores específicos (TRs) en diversos tejidos, incluyendo la retina. La vía de señalización del Factor de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF) y sus receptores (VEGFRs) cumple un papel importante durante la formación y mantenimiento de los vasos. Desequilibrios en estas vías están involucrados en diversas patologías neurodegenerativas. El zebrafish adulto (Danio rerio, ZF) es un modelo experimental establecido porque es capaz de regenerar varios tejidos luego del daño, incluyendo la retina. La comprensión de los mecanismos que regulan la proliferación, diferenciación, angiogénesis del sistema nervioso, es esencial para dilucidar las causas de enfermedades neurodegenerativas y el diseño de blancos terapéuticos.El objetivo de este trabajo fue investigar el efecto de la exposición prolongada a niveles elevados de T4 sobre la diferenciación celular y la angiogénesis, durante el proceso de regeneración retiniana. Se examinó, además, el efecto de T4 sobre la expresión de los TRs y VEGFRs en retinas de ZF adulto con o sin lesión.Materiales y Métodos:Se lesionaron las retinas de ZF con una inyección intravítrea única de Ouabaína (OUA) y se inyectó solución salina (SAL) al grupo control. Se separaron los ZF en lotes y se trataron con L-tiroxina (T4; Sigma) disuelta en 0.1 M NaOH (Vehículo-V) en el agua de la pecera (8 litros) con una concentración final de 300 μg/L (386 nM) o con vehículo (0.1M NaOH), hasta los 25 días posteriores a la lesión (25dpi). Se conformaron los siguientes grupos: SAL+V (SV), SAL+T4 (ST), OUA+V (OV), OUA+T4 (OT).Los peces fueron mantenidos en un ciclo diario de 14h de luz y 10h de oscuridad. Se procedió a la eutanasia de los peces a los 25 dpi.Se realizó inmunofluorescencia simple y doble para detectar diferentes poblaciones retinianas y vasos sobre cortes de retina. Se determinó la expresión de los ARNms de PKC, GFAP y las diferentes isoformas de TRs y VEGFRs en retinas de ZF sometidas a los diferentes tratamientos descriptos, mediante la técnica de RT-PCR estándar y cuantitativa. El análisis de los datos se realizó mediante ANOVA seguido de un post test: *p