Contribución inflamatoria en la encefalopatía derivada del Síndrome Urémico Hemolítico por la toxina Shiga 2 (Stx2) producida por la bacteria Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) en el cuerpo estriado de roedores

VASCONCELOS ESTEVES PINTO ALIPIO; CANGELOSI A; GEOGHEGAN PA; GOLDSTEIN J

Congreso; Reunión Anual de La Sociedad Argentina de Fisiología; 2014

Sociedad Argentina de Fisiología

Las vías motoras localizadas en el sistema nervioso central, que involucran el cuerpo estriado, se ven frecuentemente afectadas en pacientes infectados con EHEC. Además de la Stx2, el LPS secretado por la bacteria (por ser Gram negativa) puede estar involucrado en la patología. El objetivo de este trabajo fue determinar: i) si el LPS exacerba el efecto deletéreo de la Stx2 en la unidad neurovascular (UN) del cuerpo estriado, ii) si la Stx2 altera el comportamiento motor, y iii) la existencia de un compromiso proinflamatorio que contribuye al cuadro patológico. Ratones machos NIH (n=6 por tratamiento) fueron inyectados vía e.v. con Stx2 (5 ng/animal)+LPS (400 ng/animal), Stx2, LPS o vehículo y luego inyectados vía i.p. 2 veces al día con Dexametasona (7,5mg/kg), un anti-inflamatorio, para un ensayo de comportamiento motor a los 4 días de tratamiento o bien para determinar la alteración de la UN. Los animales fueron perfundidos intracardiacamente con paraformaldehído 4% en Buffer fosfato 0,1M (Ph=7,4) o con Evans Blue 1% en la misma solución fijadora a los 4 días y sus cerebros fueron sometidos para inmunofluorescencia con anti-MAP2 (proteína asociada a microtrúbulos 2), que marca las dendritas; anti-Gb3 (globotriaoscilceramida), que marca el receptor de membrana para la Stx2; y anti-Stx2 para inmuno localizar la Stx2 en el parénquima cerebral. Las imágenes capturadas por microscopía confocal fueron analizadas con el programa Image-J, y las estadisticas obtenidas con el GraphPad Prism. Por otra parte, se inyectaron vía intracerebroventricular ratas SD machos (n=4 por tratamiento) con Stx2 (20pg/gr) y Etanercept (10-3 ηM, receptor soluble del TNF-α y potente anti-inflamatorio), perfundidas con glutaraldehido 2,5% en PBS 0,1M y el tejido preparado para microscopia electrónica para inmunomarcación con partículas de oro coloidal para inmunolocalizar la Stx2. Los cuerpos estriados tratados con Stx2+LPS respecto a sus controles (vehículo) mostraron una disminución significativa correspondiente a la inmunofluorescencia contra MAP2 (14,14 +/- 0,57 vs. 45,30 +/- 2,88, en unidades arbitrarias UA, p