Informe sobre los avances del proyecto "Estructura y variabilidad genética de la población de puma (Puma concolor)"

CASANAVE EMMA BEATRIZ; CASTILLO DIEGO; GALLO ORLANDO

2016-06-01/2017-06-01

Biológica

Rec.Nat.Renov.-Conservacion y preservacion

Avances y resultados preliminares obtenidos con los primeros análisis de laboratorio llevados a cabo en el marco de una pasantía en el exterior por elresponsable del presente proyecto, becario CONICET Orlando Gallo (Disposición N°: 24/2016 DFyFS-MP). Los análisis se realizaron en el CIBIO-InBio (Centro de Investigação em Biodiversidade e Recursos Genéticos)/Universidade do Porto (Portugal) bajo la supervisión de la Dra. Raquel Godinho.Los objetivos específicos del proyecto son:1. Determinar el nivel de variabilidad genética de la población (o meta-población, si los análisisgenéticos identificaran una dinámica meta-poblacional);2. Estimar el tamaño efectivo de la población;3. Comprobar la existencia de estructuración genética en la población y caracterizar el flujo degenes.Metodología:En el marco de este proyecto en junio del 2016 fueron tomadas 55 muestras de tejido (33 huesosy 22 cueros) de la colección de la Dirección de Fauna y Flora Silvestre (DFyFS) depositada en elCentro Nacional Patagónico (CENPAT). En el caso de los huesos el muestreo fue realizado con untorno con el cual se ha perforado una pequeña porción del cráneo y/o mandíbula sinafectar la posibilidad de tomar medidas morfométricas diagnósticas. Posteriormente se haprocedido con la colecta de los fragmentos óseos resultante de dicha perforación y con elalmacenamiento hasta sus análisis. Para estos primeros análisis se analizaron un total de 13 muestras, categorizadas como ?invasivas?y compuestas por 4 muestras de cueros y 9 de cráneos.Para la extracción del ADN se utilizó el Ancient DNA Extraction Protocol. Un total de 30 marcadores de loci microsatélites (9 dinucleótidos y 21 tetranucleótidos) específicos para Puma concolor (Kurushima et al., 2000, [N=16: PcoB010w, PcoB207w, PcoA339w, PcoB003w, PcoB203w, PcoB210w, PcoA106w, PcoD103w, PcoA208w, PcoC112w, PcoC209w, PcoC217w, PcoD012w, PcoD217w, PcoA216w], Rodzen et al., 2007 [N=14: PcoD8, PcoD329, PcoB105, PcoD301, PcoA2, PcoB115, PcoB323, PcoD310, PcoD323, PcoB102, PcoB324, PcoC307, PcoD303, PcoD313]) fueron amplificados con la técnica de la Polymerase Chain Reaction (PCR) en tres multiplexes diferentes de 11, 10 y 9 marcadores respectivamente.Los resultados de las extracciones y amplificaciones fueron testeados en Gel de Agarosa (GelRed) con concentraciones de 0,8% (para extracciones) y 2% (para las amplificaciones). Además los ADNs fueron sometidos al proceso de purificación antes de proceder con la secuenciación de los mismos. La lectura de las secuencias resultantes se hizo a través de GeneMapper (locimicrosatélites) y BioEdit (ADNmt).El cálculo de estimaciones básicas sobre genética poblacional (heterozigosidad observada [Ho] yesperada [He] y el equilibrio de Hardy-Weinberg) se llevó a cabo utilizando Arlequin 3.5.2 (Exoffiery Lischer 2010). Para evaluar la existencia de una estructura poblacional, se utilizó un modelobayesiano basado en un método de agrupamiento implementado en STRUCTURE 2.3.4 (Pritchardet al., 2000).