Efecto dual del extracto del alga Dictyota dichotoma en células tumorales de mama y osteoblásticas normales

FERNÁNDEZ, C; LEZCANO, V; PARODI, E. R; MARIANI, F.; MORELLI, S

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; 2° CONGRESO ARGENTINO DE OSTEOLOGÍA; XXXV Reunión Anual de AAOMM; XIII Congreso Argentino de Osteoporosis; 2018

Los fitoestrógenos son polifenoles que poseen similitud estructural y funcional con los estrógenos. Los más conocidos son las isoflavonas, que se encuentran en los vegetales y tienen un demostrado efecto anticancerígeno. En estudios previos, demostramos los efectos benéficos del fitoestrógeno quercetina en células osteoblásticas normales, así como su acción antitumoral en células de cáncer de mama. Buscando compuestos naturales alternativos, y teniendo en cuenta que las macroalgas son uno de los recursos naturales más ricos en compuestos bioactivos, en el presente trabajo estudiamos in vitro el efecto antitumoral del extracto de alga (EA) de D. dichotoma , una macroalga que forma grandes bancos a lo largo de la costa atlántica y presenta alto contenido de polifenoles y poder antioxidante. Se estudió el efecto antitumoral del EA evaluando proliferación, migración y adhesión de células derivadas de cáncer mamario humano (MCF-7) que expresan receptor de estrógeno. El contenido de polifenoles del EA se midió mediante la técnica de Folin-Ciocalteu y fue de 586,96±5 µg GAE/g alga seca. La actividad antioxidante se evaluó mediante el ensayo de atrapamiento de radicales DPPH? y fue de 17,61±0,82% para un EA de concentración 12 mg/ml. Los ensayos de proliferación celular realizados por tinción con azul de tripán, indican que 24h de tratamiento con EA inhiben significativamente la proliferación celular en forma dependiente de la dosis, siendo más efectiva la mayor dosis estudiada (81,78±4,71% vs. Ctrl.), con un incremento concomitante de células muertas (18,22±4,71% vs. Ctrl.). El ensayo colorimétrico de viabilidad MTS también mostró una disminución significativa de células viables en forma dependiente de la dosis de EA, luego de 48h de tratamiento y a partir de 100µg/ml (82,63±4,19%vs. Ctrl.). Mediante la técnica de reparación de la herida se demostró que el EA inhibe la migración celular en un 23,4±4,49% y 65,7±5,04% con respecto al día cero, para 250 y 500 µg/ml, respectivamente. Asimismo, el EA disminuyó considerablemente la capacidad de adhesión de estas células a todas las dosis evaluadas, obteniendo valores de 23,56±3,24%, 34,03±0,94%, 29,74±9,72% y 4,19±1,44% vs. Ctrl., para 100, 200, 250 y 500 µg/ml. Mediante tinción con violeta cristal se evaluaron los efectos del EA sobre células normales derivadas de osteoblastos humanos (hFOB) y se encontró que dosis menores a 200 µg/ml no modifican la morfología y el número de células con respecto al control. Sin embargo, 500µg/ml de EA se comporta como una dosis citotóxica para estas células. A su vez, se realizaron estudios de diferenciación celular con bajas dosis de EA (1µg/ml) y el bisfosfonato Lidandronato (LID, 1nM) en células pre-osteoblásticas MC3T3-E1. Ambos tratamientos estimularon significativamente la actividad de fosfatasa alcalina a 7 días de incubación (128,73±1,28% EA vs. Ctrl.; 111,74±4,45% LID vs. Ctrl.). Luego de 21 y 28 días de incubación en medio osteogénico se encontró un incremento significativo de marcadores de diferenciación tardíos (depósitos de calcio y producción de colágeno), analizados por métodos colorimétricos. En conjunto, los resultados indican que D. dichotoma constituye una fuente valiosa de compuestos bioactivos con potencial uso en la industria farmacéutica por su efecto antiproliferativo en células derivadas de cáncer mamario humano, su baja citotoxicidad en células normales de hueso y sus efectos positivos en la diferenciación osteoblástica.