INBIOSUR   25013
INSTITUTO DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y BIOMEDICAS DEL SUR
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Efecto de Lidandronato y Quercetina en la osteoblastogénesis y vías de señalización celular activadas
Autor/es:
MORELLI S; MONTEAGUDO C; LEZCANO V
Lugar:
CABA
Reunión:
Congreso; XXXIV Reunión Científica Anual de la Asociación Argentina de Osteología y Metabolismo Mineral; 2017
Institución organizadora:
ASOCIACIÓN ARGENTINA OSTEOLOGIA Y METABOLISMO MINERAL
Resumen:
Debido a la importancia de buscar terapias adyuvantes que complementen el efecto de los agentes anti-resortivos mediante la modulación de células que participan en la formación ósea, el objetivo general de este trabajo es estudiar si fármacos actualmente utilizados para tratamientos de osteoporosis (Bisfosfonatos, fitoestrógenos) participan en procesos relacionados con la osteoblastogénesis, evaluando in vitro la proliferación y diferenciación de células osteoblásticas.Como indicadores de osteoblastogénesis se evaluaron la actividad de fosfatasa alcalina (ALP), los depósitos de calcio y los niveles de colágeno, en la línea celular pre-osteoblástica murina MC3T3-E1 y en células progenitoras de médula ósea (CPMO) derivadas de rata, que fueron sometidas a medio osteogénico en ausencia o presencia del bisfosfonato Lidandronato (LID) y el fitoestrógeno quercetina (QUE).Los resultados de tiempo-respuesta indican que en presencia de medio osteogénico (medio de crecimiento + β-glicerofosfato + ácido ascórbico) las células presentan un pico de ALP a los 7 días de incubación (35% ±2,43% vs. Día 0). Los ensayos de dosis-respuestas revelan que QUE 10-8M y LID 10-9M presentan un incremento significativo con respecto al control (QUE 36,51%±3,44% y LID 12,37%±3,04%). Posteriormente, y en base a las dosis indicadas, se evaluaron colorimétricamente dos parámetros de diferenciación más tardíos. Mediante tinción con Alizarin red y Sirius red se evaluaron los depósitos de calcio y niveles de colágeno, respectivamente, luego de 21 y 28 días de tratamiento. Se observó un aumento significativo para ambos parámetros a los 21 días de incubación con LID y QUE, perdiéndose el efecto a los 28 días. Los resultados se evaluaron con fotografías representativas de cada condición bajo microscopio óptico. La cuantificación espectrofotométrica de los niveles de colágeno mostró un incremento significativo con respecto al control de 9,22% (±1,37%) para LID y 15,37% (±2,58%) para QUE. Se ha demostrado en los últimos años la relevancia de la activación de la vía de señalización Wnt/βcatenina/GSK3 en la formación ósea, por lo tanto, otro objetivo del presente trabajo fue evaluar mediante ensayos de Western blot la participación de la vía GSK3β en respuesta a QUE. Se usó como control positivo LiCl (5 mM), inhibidor de GSK3β que estimula la vía de señalización Wnt. Se observó que QUE 10-8M induce aumento en la fosforilación de GSK3β y por lo tanto su inactivación a 30 min y 24 h de tratamiento. A su vez, la misma dosis de QUE induce activación de AKT, quinasa encargada de fosforilar e inactivar a GSK3β. Esta modulación trae como consecuencia el aumento de βcatenina por inhibición de su degradación, y posterior traslocación a núcleo para inducir diversas respuestas biológicas, entre ellas, la diferenciación celular. Los tratamientos con QUE por 24h provocaron un aumento en la expresión de βcatenina en el citosol, determinado por fraccionamiento subcelular seguido de Western blot. Al mismo tiempo, por microscopía de fluorescencia se observó mayor localización de dicha proteína en núcleo con respecto al control.Estos resultados permiten concluir que tanto el compuesto farmacológico (LID) como el compuesto nutracéutico (QUE) poseen efecto positivo en la osteoblastogénesis y que el uso de fitoestrógenos como QUE podría ser una alternativa basada en la estimulación de vías anabólicas en el hueso.