INEDES   24797
INSTITUTO DE ECOLOGIA Y DESARROLLO SUSTENTABLE
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
DESARROLLO DE UN MÉTODO DE RESONANCIA PLASMÓNICA DE SUPERFICIE PARA LA DETECCIÓN DE ENTEROTOXINAS ESTAFILOCÓCICAS.
Autor/es:
NOLI TRUANT SOFÍA; MITAROTONDA, ROMINA; MALCHIODI EMILIO L.; FERNANDEZ LYNCH MJ; ROMASANTA PABLO; FERNANDEZ M; SARRATEA MARÍA BELÉN; ANTONOGLOU M BELEN; DE MARZI MAURICIO C
Lugar:
Luján
Reunión:
Jornada; I Jornadas de Ciencia, Tecnología y Extensión UNLu; 2018
Institución organizadora:
Universidad Nacional de Luján
Resumen:
Las enterotoxinas estafilocócicas son uno de los agentes causales más importantes de la intoxicación alimentaria. Estas moléculas funcionan como toxinas gastrointestinales y superantígenos (SAgs) ya que pueden unir simultáneamente moléculas del Complejo Mayor de Histocompatibilidad de clase II (CMH-II) y receptores de los Linfocitos T (LT), lo que conduce a una activación de células T policlonales inespecífica y a la liberación masiva de citoquinas proinflamatorias. Los síntomas mas comunes incluyen vómitos y diarrea; sin embargo, en casos más graves, la diseminación sistémica de as toxinas puede dar como resultado un síndrome de shock tóxico que puede ser letal en pocas horas. Solo pequeñas cantidades de estas toxinas termoestables son necesarias para causar la enfermedad. Por lo tanto, es muy importante detectar bajas concentraciones de SAgs en muestras biológicas. En trabajos previos, hemos informado un método de resonancia plasmónica de superficie (SPR) basado en un enfoque de doble sándwich de anticuerpos que puede detectar niveles picomolares del SAg SEG. En el presente trabajo, el objetivo fue evaluar la influencia de la cantidad de anticuerpos inmovilizados y el uso de reactivos que potencian las alternativas para mejorar el límite de detección. Tres cantidades diferentes de anticuerpo primario se acoplaron covalentemente en las superficies independientes del chip sensor CM5: 3500, 6800 y 11000 RU. En concordancia con nuestros ensayos previos, se detectaron 1.10-12 M de SEG en la superficie con 6800 RU. También utilizamos el ligando natural de varios SAgs, una cadena de un receptor de LT (TCR) denominada Vb8.2, como reactivo secundario para aumentar la señal. Sin embargo, no demostró ser útil probablemente debido a la oclusión del sitio de unión durante la captura. También estudiamos el uso potencial de nanopartículas (NPs) recubiertas de anticuerpos como una estrategia de amplificación alternativa. Las NP se recubrieron con el anticuerpo después del tratamiento con glutamina, dopamina o solo. Para la misma cantidad de SAg analizado, el sistema que empleó NPs dio un nivel de respuesta más alto que los anticuerpos solos. En general, los biosensores SPR ofrecen la capacidad de monitoreo continuo en tiempo real y alta sensibilidad que puede ser adecuado para la detección de enterotoxinas en industrias alimentarias, laboratorios y agencias reguladoras.