Evaluación de la viabilidad en condiciones gastrointestinales simuladas de macrocápsulas probióticas destinadas a lechones

ZIMMERMANN JORGE ALBERTO; SIGNORINI MARCELO LISANDRO; SOTO LORENA PAOLA; MARTI LUIS ENRIQUE; ROSMINI MARCELO RAUL; ZBRUN MARIA VIRGINA; FUSARI MARCIA LUCIA; SIRINI NOELI; ACOSTA FEDERICO

Evento Virtual

Jornada; Jornada de Temáticas específicas 2020: Inocuidad en Producción Porcina: enfoque desde el concepto de Una Salud; 2020

Asociación Argentina de Microbiología

Los probióticos son utilizados como una alternativa al uso de ATM. Para que puedan ejercer su efecto benéfico deben atravesar las barreras gastrointestinales y llegar en cantidades adecuadas al sitio de acción. La encapsulación es una técnica utilizada para proteger a los microorganismos de las condiciones adversas. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto protector de la encapsulación frente a condiciones gastrointestinales simuladas. Las macrocápsulas utilizadas eran liofilizadas y estaban conformadas por la cepa Lactobacillus reuteri DSPV002C y una matriz de gelatina, almidón pregelificado y permeado de suero como crioprotector. El cultivo libre de la cepa se produjo en MRS a 37°C durante 18 h. Se prepararon soluciones simuladas de jugo gástrico (JG) (pepsina 0,35% p/v y NaCl 0,2% p/v con pH 3,0) y jugo intestinal (JI) (NaCl 1,1% p/v; NaHCO3 0,2% p/v; tripsina 0,1% p/v y sales biliares al 1,8% p/v con pH 8,0). Tres macrocápsulas y 1 ml de cultivo libre fueron incubadas con 9 ml de JG a 37ºC en agitación continua durante 3 h. Luego la muestra fue centrifugada y el sedimento resuspendido en 9 ml de JI. Los tubos fueron incubados durante 3 h a 37 ºC en agitación continua. La viabilidad fue evaluada mediante recuento en placa en MRS y citometría de flujo cada 1,5 h. Para citometría de flujo, las soluciones de cultivo libre y macrocápsulas fueron ajustadas a una concentración de 1x106 UFC/ml. Posteriormente, se realizó la tinción de las mismas con 1 μl de SYTO9(3,34 mM) y 0,5 μl de IP (20 mM) en 100 μl de NaCl 0,85% p/v y se colocaron 20 μl en cada inóculo bacteriano. Finalmente, las células fueron adquiridas con un citómetro de flujo Attune NxT y analizado con software FlowJo. La pérdida de viabilidad de la cepa fue menor en las macrocápsulas que en el cultivo libre a lo largo de todo el ensayo (P>0,001) cuando se analizó por recuento en placa. En el tiempo 0, los recuentos fueron de 10,68±0,05 Log UFC/ml para las macrocápsulas y 9,18±0,08 Log UFC/ml para el cultivo libre. Luego de 6 h de incubación, la pérdida de viabilidad total de las macrocápsulas fue de 0,58±0,09 Log UFC/ml frente a 1,56±0,16 Log UFC/ml del cultivo libre. El porcentaje de supervivencia de los microorganismos encapsulados fue del 26,53% y del cultivo libre fue del 2,85%. Mediante citometría de flujo, se pudieron identificar 2 poblaciones celulares, tanto en microorganismos encapsulados como en forma de cultivo libre. El porcentaje de microorganismos vivos fue similar en el cultivo libre y en las macrocápsulas (P>0,05). Luego de 6 h, las macrocápsulas mostraron una pérdida de viabilidad del 50±18,52 % y el cultivo libre disminuyó su viabilidad un 61±2,56%. Los resultados obtenidos mediante citometría de flujo fueron diferentes posiblemente debido a que esta técnica se basa en la integridad de la membrana celular. La macroencapsulación es una técnica adecuada para proteger a L. reuteri de las condiciones gastrointestinales adversas y permitiría que mayor cantidad de bacterias lleguen viables al sitio de acción en intestino.